Direct RT-qPCR komplet II
Opis kompleta:
◮Direct RT-qPCR Kit, koji koristi Foreasy reverznu transkriptazu i Foreasy HS Taq DNA polimerazu koju razvija Foregene, s jedinstvenim reakcijskim puferom, čini ovaj komplet snažnom otpornošću i kompatibilnošću, a može izravno testirati reakciju koristeći Foregene Lysis sustav kao predložak.Ovaj se komplet može primijeniti za razvoj kompleta za otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 i drugih patogenih bakterija za razvoj kompleta za otkrivanje nukleinske kiseline.
Opis
Direct RT-qPCR komplet pruža zasebno pakiran RT-qPCR pufer, visoko učinkovitu Foreasy HS Taq DNA polimerazui Foreasy reverzna transkriptaza (MMLV),što ga čini prikladnim za kreiranje pozadinskih kompleta i prilagodbu sustava, unutar jednostavne provjere.
Direct RT-qPCR Kit, koji koristi Foreasy reverznu transkriptazu i Foreasy HS Taq DNA polimerazu koju razvija Foregene, s jedinstvenim reakcijskim puferom, čini ovaj komplet snažnom otpornošću i kompatibilnošću, a može izravno testirati reakciju koristeći Foregene Lysis sustav kao predložak.Ovaj se komplet može primijeniti za razvoj kompleta za otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 i drugih patogenih bakterija za razvoj kompleta za otkrivanje nukleinske kiseline.
Ovaj komplet može izravno biti sastavni dio IVD proizvoda, koristeći se lako i brzo.Potrebna mu je samo jednostavna provjera, bez ponovnog razvijanja.
Tehnički podaci
500T, 50.000T
Komponente kompleta
| Sadržaj kompleta (20 μL reakcijski sustav) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Foreasy Rverzna transkriptaza (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polimeraza (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 mL×10 |
| 2× Izravni RT-qPCRPufer | 1 mL × 5 | 500 mL ×1 |
| Uputa | 1 | 1 |
Radni koraci
O: Pripremite predložak i reagens
1. Pripremite pripremljeni RNA predložak (preporučuje se upotreba Foregene Total RNA Isolation Kit serije kompleta za izdvajanje i pročišćavanje RNA predloška) ili proizvoda za krekiranje uzorka (preporučuje se korištenje Foregene Lysis sustava), specifičnih početnica (10 μM) i drugih relevantnih potrošnih materijala, instrumenta.
2. Stavite 2× izravni RT-qPCR pufer, ddH2O bez RNaze i 20× ROX referentnu boju (ako je potrebno) u kutiju s ledom, čineći da se prirodno otope i lagano promiješajte.
B: Pripremite RT-qPCR sustav
Uzmite polovicu volumena reakcijskog pufera reakcijskog sustava (na primjer, ako je volumen sustava 20 μL, potrebno je dobiti 10 μL 2× izravni RT-qPCR pufer). Zaodgovarajuću količinu enzima,predlažemo toM-MLV：10-30 U/20 μL reakcijski sustav,TaqDNA polimeraza:1-2 U/20 μL reakcijski sustavovo je naš prijedlog, trebali biste ga testirati i prilagoditi), dodajte šablonu RNA, specifične početnice i sonde te dodajte ddH bez RNaze2O do 20 μL.Specifična priprema RT-qPCR reakcijskog sustava može se uputiti na sljedeću tablicu 1.
Tablica 1: Priprema RT-qPCR sustava
| komponenta | Volumen | Konačna koncentracija |
| 2× izravni RT-qPCR međuspremnik | 10 μL | 1× |
| Foreasy reverzna transkriptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polimeraza | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Obrnuti primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Predložak (RNA ili lizat) | X μL | |
| 20× ROX referentna boja | - | 1* |
| RNaza-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Ukupni volumen | 20 μL |
Napomena: Forward Primer i Reverse Primer specifični su primeri ciljnog gena.Sustav qPCR-a može se prilagoditi prema praktičnim eksperimentalnim i PCR modelima.Preporučujemo 400 nM za konačnu koncentraciju većine primera.Molimo prilagodite volumen specifičnih primera i sondi prema pripremljenoj koncentraciji i preporučenoj konačnoj koncentraciji.
1*: Odaberite odgovarajuću konačnu koncentraciju ROX referentne boje prema različitim kvantitativnim PCR instrumentima.Optimalna ROX referentna koncentracija boje uobičajenih kvantitativnih PCR instrumenata prikazana je u sljedećoj tablici:
| Kvantitativni PCR instrumenti | Konačna koncentracija ROX referentne boje |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Prvi korak,itd. | 1× (na primjer, dodajte 1 μl 20 × ROX referentne boje u 20 μL reakcijskog sustava) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P i Mx4000 itd. | 0,5 × (na primjer, dodajte 0,5 μl 20 × ROX referentne boje u 20 μL reakcijskog sustava) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorf kvantitativni PCR instrument itd. | Bez ROX referentne boje |
Skladištenje i rok trajanja
Komplet treba čuvati na -20 ± 5 ℃.Treba ga odmah pohraniti u termostatski hladnjak na -20 ℃.Rok valjanosti je 2 godine ako se skladišti u odgovarajućim uvjetima.
