Komplet za izolaciju ukupne životinjske RNA Kompleti za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA za životinjska tkiva i stanice
Opis kompleta:
Brzo i učinkovito ekstrahirajte ukupnu RNK visoke čistoće i kvalitete iz različitih životinjskih tkiva.
Ne morate brinuti o degradaciji RNK.Cijeli sustav je bez RNaze
Učinkovito uklonite DNK pomoću DNA-Cleaning Column
Uklonite DNA bez dodavanja DNaze
Jednostavno—sve operacije se dovršavaju na sobnoj temperaturi
Brzo—operacija se može završiti za 30 minuta
Sigurno—ne koriste se organski reagensi
Visoka čistoća—OD260/280≈1,8-2,1
Opisi kompleta
50 priprema, 200 priprema
Ovaj komplet koristispin stupac i formularazvila naša tvrtka, koja može ekstrahirati ukupnu RNK visoke čistoće i kvalitete iz različitih životinjskih tkiva uz visoku učinkovitost. Omogućuje učinkovitu kolonu za čišćenje DNK, koja može lako odvojiti i adsorbirati genomsku DNK iz supernatanta i lizata tkiva, jednostavno i štedi vrijeme;Kolona samo za RNA može učinkovito vezati RNA i može se istovremeno obrađivati s jedinstvenom formulom Puno uzoraka.
Cijeli sustav je bez RNaze, tako da se ekstrahirana RNA ne degradira;Buffer RW1, Buffer RW2 sustav pranja pufera, tako da dobivena RNA ne sadrži proteine, DNA, ione i zagađenje organskim spojevima.
Komponente kompleta
| Komplet za izolaciju ukupne životinjske RNK | ||
| Komponente kompleta | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Međuspremnik RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Međuspremnik RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Međuspremnik RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Međuspremnik RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH2O bez RNaze | 10 ml | 40 ml |
| Kolona samo za RNA | 50 | 200 |
| Kolona za čišćenje DNK | 50 | 200 |
| Upute za uporabu | 1 komad | 1 komad |
Informacije o Proizvodu
| Format | Spin stupac | Komponenta za pročišćavanje | Foregene kolona, reagens |
| Fluks | 1-24 uzoraka | Vrijeme po pripremi | ~30 min (24 uzorka) |
| Centrifuga | Stolna centrifuga | Odvajanje pirolizom | Centrifugalno odvajanje |
| Uzorak | Životinjsko tkivo;ćelija | Količina uzoraka | Tkivo:10-20 mg;Ćelija:(1-5)×106 |
| Volumen eluacije | 50-200 μL | Maksimalni volumen punjenja | 850 μL |
Značajke i prednosti
■ Nema potrebe brinuti o razgradnji RNA;cijeli sustav je bez RNaze
■ Učinkovito uklonite DNK pomoću DNA-Cleaning Column
■ Uklonite DNA bez dodavanja DNaze
■ Jednostavne - sve operacije se dovršavaju na sobnoj temperaturi
■ Brzo - operacija se može završiti za 30 minuta
■ Sigurno - nije potreban organski reagens
■ Visoka čistoća -OD260/280≈1,8-2,1
Primjena kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA iz različitih svježih ili smrznutih životinjskih tkiva ili kultiviranih stanica.
Parametri proizvoda
■ Primjene nizvodno: sinteza prvog lanca cDNA, RT-PCR, molekularno kloniranje, Northern Blot, itd.
■ Uzorci: životinjska tkiva, uzgojene stanice
■ Doziranje: Tkiva 10-20mg, Stanice (2-5)×106
■ Maksimalni kapacitet vezanja DNA kolone za pročišćavanje: 80 μg
■ Volumen eluacije: 50-200 μl
Dijagram
Animal Total RNA Isolation Kit tretiran 20 mg
Svježi uzorci miševa, uzmite 5% pročišćene ukupne RNA 1% agara
Glikogel elektroforeza
1: Slezena 2: Bubreg
3: Jetra 4: Srce
Skladištenje i rok trajanja
Komplet se može čuvati 24 mjeseca na sobnoj temperaturi (15–25 ℃) ili 2–8 ℃ duže vrijeme.Pufer RL1 može se pohraniti na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja β- merkaptoetanola (po izboru).
Citirani članci
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanočestice nalik lipidima napunjene mRNA za uređivanje baze jetre putem optimizacije središnjeg kompozitnog dizajna.Adv.funkcijaMater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontana apoptoza stanica u terapeutskom pripravku matičnih stanica ima imunomodulatorne učinke oslobađanjem fosfatidilserina.Signal Transduct Target Ther.14. srpnja 2021.; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Modifikacija tRNA N7-metilguanozin pojačava onkogenu translaciju mRNA i potiče progresiju intrahepatičnog kolangiokarcinoma.Mol ćelija.29. srpnja 2021.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9,225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Modifikacija m6A posredovana Mettl14 olakšava regeneraciju jetre održavanjem homeostaze endoplazmatskog retikuluma.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kompleti za izolaciju RNK za drugi izvori uzorakasu dostupni:
Stanični, biljni, virusni, krvni itd.
RNA nije ekstrahirana ili su prinosi RNA niski
Često postoje različiti čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNA u uzorku tkiva, način rada, volumen elucije itd.
1. Tijekom rada provedena je ledena kupelj ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje.
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25 °C) tijekom cijelog procesa, ne koristite ledenu kupku i centrifugirajte na niskim temperaturama.
2. Nepravilno čuvanje uzorka ili predugo vrijeme čuvanja uzorka.
Preporuka: Pohranite uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovljenu upotrebu zamrzavanjem-otapanjem;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.
3. Nedovoljna liza uzorka.
Preporuka: Prilikom homogeniziranja tkiva, osigurajte da je tkivo dovoljno homogenizirano i da su stanice tkiva dovoljno podijeljene da bi se objasnilo oslobađanje RNK.
4. Eluens nije pravilno dodan.
Preporuka: potvrdite da je ddH bez RNaze2O se dodaje kap po kap u sredinu membrane kolone za pročišćavanje.
5. Točan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer RL2 ili pufer RW2.
Preporuka: Slijedite upute, dodajte točan volumen apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Doziranje uzorka tkiva nije odgovarajuće.
Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 106stanica po 500 μl pufera RL1, budući da pretjerana uporaba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNA.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Preporuka: Volumen eluacije kolone za pročišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja puferom RW2.
Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugirajte praznu epruvetu 1 minutu, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.
Pročišćena RNA se razgrađuje
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNazom i manipulacija, itd.
1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili stanice ne iskoriste na vrijeme nakon prikupljanja, odmah ih kriokonzervirajte na -80 °C ili u tekućem dušiku.Za izdvajanje RNK, upotrijebite tek uzeti uzorak tkiva ili stanice kad god je to moguće.
2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Kada pohranjujete uzorke tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja i ukloniti jedan od dijelova kada ih koristite kako biste izbjegli ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i razgradnju RNK.
3. RNaza se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tijekom operacije.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim sobama za manipulaciju RNK, a stol se očisti prije eksperimenta.
Nosite jednokratne rukavice i maske tijekom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNaze.
4. Reagensi su kontaminirani RNazom tijekom upotrebe.
Preporuka: Zamijenite novim Kompletom za izolaciju ukupne životinjske RNA za povezane pokuse.
5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u manipulaciji RNK kontaminirani su RNazom.
Preporuka: potvrdite da epruvete za centrifugiranje, vrhovi, pipete itd. koji se koriste u ekstrakciji RNA ne sadrže RNaze.
Pročišćena dobivena RNA utječe na nizvodne eksperimente
RNA pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je sadržaj iona soli, proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluirana RNA ima ostatke iona soli.
Preporuka: potvrdite da je točan volumen etanola dodan u pufer RW2 i izvedite 2 ispiranja kolone za pročišćavanje centrifugalnom brzinom naznačenom za rad;ako ima ostataka iona soli, ostavite kolonu za pročišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.
2. Ostatak etanola u eluiranoj RNA.
Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete pri brzini centrifugiranja navedenoj za rad, produžite vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja prazne epruvete kako biste maksimizirali uklanjanje ostataka etanola.
