Komplet Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Kompleti za izravnu lizu stanica spremni za qRT-PCR u jednom koraku
Opisi
Ovaj komplet koristi jedinstveni sustav pufera za lizu koji može brzo osloboditi RNA iz uzgojenih staničnih uzoraka za RT-qPCR reakcije, čime se eliminira dugotrajan i težak proces pročišćavanja RNA.Predložak RNA može se dobiti za samo 7 minuta.5×Direct RT Mix i 2×Direct qPCR Mix-SYBR reagensi koji se isporučuju u kompletu mogu brzo i učinkovito dobiti kvantitativne PCR rezultate u stvarnom vremenu.
5×Direct RT Mix i 2×Direct qPCR Mix-SYBR ima jaku toleranciju na inhibitore, a lizat uzoraka može se izravno koristiti kao obrazac za RT-qPCR.Ovaj komplet sadrži jedinstvenu Foregene reverznu transkriptazu visokog afiniteta RNA i Hot D-Taq DNA polimerazu, dNTP, MgCl2, reakcijski pufer, PCR optimizator i stabilizator.
Tehnički podaci
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponente kompleta
| dio I | Međuspremnik CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Međuspremnik ST | |
| Dio II | DNK brisač |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX referentna boja | |
| ddH2O bez RNaze | |
| upute | |
Značajke i prednosti
■Jednostavno i učinkovito: s tehnologijom Cell Direct RT, uzorci RNA mogu se dobiti za samo 7 minuta.
■ Potreba za uzorkom je mala, može se testirati samo 10 stanica.
■ Visoka propusnost: može brzo detektirati RNA u stanicama uzgojenim u pločama s 384, 96, 24, 12, 6 jažica.
■ DNA Eraser može brzo ukloniti oslobođene genome, uvelike smanjiti utjecaj na naknadne eksperimentalne rezultate.
■ Optimizirani RT i qPCR sustav čini RT-PCR reverznu transkripciju u dva koraka učinkovitijom, a PCR specifičnijom i otpornijom na inhibitore RT-qPCR reakcije.
Primjena kompleta
Područje primjene: kultivirane stanice.
- RNA oslobođena lizom uzorka: primjenjivo samo na RT-qPCR predložak ovog kompleta.
- Komplet se može koristiti u sljedeće svrhe: analiza ekspresije gena, verifikacija učinka utišavanja gena posredovanog siRNA, probir lijekova itd.
Dijagram
Skladištenje i rok trajanja
Dio I ovog pribora treba čuvati na 4 ℃;Dio II treba čuvati na -20 ℃.
Foregene Protease Plus II treba čuvati na 4℃, nemojte smrzavati na -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR treba pohraniti na -20℃po mraku;ako se često koristi, može se pohraniti i na 4℃ za kratkotrajno skladištenje (potrošiti unutar 10 dana).
Načela dizajna početnica za PCR u stvarnom vremenu
Forward Primer i Reverse Primer
Za PCR u stvarnom vremenu, dizajn primera je vrlo važan.Primeri su povezani sa specifičnošću i učinkovitošću PCR amplifikacije i mogu se dizajnirati prema sljedećim načelima:
Duljina primera: 18-30bp.
GC sadržaj: 40-60%.
Tm vrijednost: Softver za dizajn primera, kao što je Primer 5, može dati Tm vrijednost primera.Vrijednosti Tm uzvodno i nizvodno početnica trebaju biti što bliže.Također se može koristiti formula za izračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Prilikom izvođenja PCR-a, temperatura ispod vrijednosti Tm klica od 5 °C općenito se odabire kao temperatura žarenja (odgovarajuće povećanje temperature žarenja može povećati specifičnost PCR reakcije).
Primeri i PCR proizvodi:
Duljina produkta PCR amplifikacije primera dizajna poželjno je 100-150 bp.
Dizajn temeljne premaze u sekundarnom strukturnom području predloška treba izbjegavati što je više moguće.
Izbjegavajte stvaranje 2 ili više komplementarnih baza između 3' krajeva uzvodnih i nizvodnih početnica.
Primer 3' terminalna baza ne može biti prisutna s 3 dodatna uzastopna G ili C.
Sami primeri ne mogu imati komplementarne strukture, inače će se formirati struktura ukosnice koja utječe na PCR pojačanje.
ATCG treba raspodijeliti što je ravnomjernije moguće u nizu početnica, a 3' terminalnu bazu treba izbjegavati jer T.
Dodatak 1：Cell Direct RT-qPCR Kit dopunsko pakiranje komponenti
1.Otopina za lizu stanica
|
| |||
| Komponente kompleta (sustav za lizu s 24 jažice / jažica) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Dioja | Međuspremnik CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Međuspremnik ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DioII | DNK brisač | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT mješavina
|
| |
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sustav) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sustav) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX referentna boja | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Priručnici s uputama:
