(96 jažica) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR komplet – SYBR Green I
Opisi
The(96-bunar) QuickEasyTM Komplet Cell Direct RT-qPCR–SYBR Zelena Ipružajedinstveni sustav pufera za lizuto brzo oslobađaju RNKiz uzgojene staniceuzoraka za RT-qPCR reakcije, čime se eliminira dugotrajno i napornoProces pročišćavanja RNA, a potrebno je samo 7 minuta da se dobije potrebna RNA predložak.The5× Direct RT Mixi2× Direct qPCR Mix-SYBRkoji se nalazi u kutiji može brzo iučinkovito dobiti kvantitativne u stvarnom vremenuPCR rezultati.
5× Direct RT Mix i 2× Direct qPCR Mix-SYBR imaju jaku toleranciju na inhibitore i mogu koristiti lizat uzorka koji se testira kao obrazac za učinkovitu reverznu transkripciju i specifično pojačanje.Reagens sadrži Foregene jedinstvenu reverznu transkriptazu s visokim afinitetom za RNA, kao i Hot D-Taq DNA polimerazu, dNTPs, MgCl2 , reakcijski pufer, PCR optimizator i stabilizator, i može se koristiti zajedno s puferom za lizu za brzo, jednostavno i točno otkrivanje uzorka, a ima karakteristike visoke osjetljivosti, jake specifičnosti i dobre stabilnosti.
Komplet je usmjeren na lizu mikrosustava kultiviranih stanica s 96 jažica i ima dobru ujednačenost i konzistenciju;komponente kompleta pružaju 96 reakcija lize, 96 reakcija reverzne transkripcije i 96×2 qPCR reakcija, koje mogu zadovoljiti staničnu ploču s 96 jažica za jednokratnu upotrebu, izbjegavajući onečišćenje uzrokovano opetovanim otvaranjem, smrzavanjem i odmrzavanjem reagensa i degradaciju performansi reagensa.
Komponente kompleta
| Sastav kompleta ( 50 μL sustav za lizu/20 μLRT reakcijski sustav /20μL qPCR reakcijski sustav) | DRT-03011 | Napomena | |
| 96T | |||
| DioI | PuferCL | 5 mL | ĆelijaLiza |
| ForegeneProteaza Plus II | 100 μL | ||
| PuferST | 500 μL | ||
| Dio II | DNKGumica za brisanje | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× izravna qPCR mješavina-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX referentna boja | 400µL | ||
| RNaza- BesplatnoddH2 O | 1,7 mL |
| |
| Mgodišnji | 1 komad | 1 porcija | |
*: Reagens za lizu DNA Eraser uključen je u Dio II kompleta;Komponente za lizu stanica, RT i qPCR mogu se kupiti zasebno.
Značajke i prednosti
■Jednostavno i učinkovito: s tehnologijom Cell Direct RT, uzorci RNA mogu se dobiti za samo 7 minuta.
■ Potreba za uzorkom je mala, može se testirati samo 10 stanica.
■ Visoka propusnost: može brzo detektirati RNA u stanicama uzgojenim u pločama s 384, 96, 24, 12, 6 jažica.
■ DNA Eraser može brzo ukloniti oslobođene genome, uvelike smanjiti utjecaj na naknadne eksperimentalne rezultate.
■ Optimizirani RT i qPCR sustav čini RT-PCR reverznu transkripciju u dva koraka učinkovitijom, a PCR specifičnijom i otpornijom na inhibitore RT-qPCR reakcije.
Primjena kompleta
Područje primjene: kultivirane stanice.
- RNA oslobođena lizom uzorka: primjenjivo samo na RT-qPCR predložak ovog kompleta.
- Komplet se može koristiti u sljedeće svrhe: analiza ekspresije gena, verifikacija učinka utišavanja gena posredovanog siRNA, probir lijekova itd.
Skladištenje i rok trajanja
Dio I ovog pribora treba pohraniti na 4℃;Dio II treba čuvati na -20 ℃.
Foregene Protease Plus II treba čuvati na 4℃, nemojte smrzavati na -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman treba pohraniti na -20℃po mraku;ako se često koristi, može se pohraniti i na 4℃ za kratkotrajno skladištenje (potrošiti unutar 10 dana).
Načela dizajna početnica za PCR u stvarnom vremenu
Forward Primer i Reverse Primer
Za PCR u stvarnom vremenu, dizajn primera je vrlo važan.Primeri su povezani sa specifičnošću i učinkovitošću PCR amplifikacije i mogu se dizajnirati prema sljedećim načelima:
- Duljina primera: 18-30bp.
- GC sadržaj: 40-60%.
- Tm vrijednost: Softver za dizajn primera, kao što je Primer 5, može dati Tm vrijednost primera.Vrijednosti Tm uzvodno i nizvodno početnica trebaju biti što bliže.Također se može koristiti formula za izračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Prilikom izvođenja PCR-a, temperatura ispod vrijednosti Tm klica od 5 °C općenito se odabire kao temperatura žarenja (odgovarajuće povećanje temperature žarenja može povećati specifičnost PCR reakcije).
- Primeri i PCR proizvodi:
- Duljina produkta PCR amplifikacije primera dizajna poželjno je 100-150 bp.
- Dizajn temeljne premaze u sekundarnom strukturnom području predloška treba izbjegavati što je više moguće.
- Izbjegavajte stvaranje 2 ili više komplementarnih baza između 3' krajeva uzvodnih i nizvodnih početnica.
- Primer 3' terminalna baza ne može biti prisutna s 3 dodatna uzastopna G ili C.
- Sami primeri ne mogu imati komplementarne strukture, inače će se formirati struktura ukosnice koja utječe na PCR pojačanje.
- ATCG treba raspodijeliti što je ravnomjernije moguće u nizu početnica, a 3' terminalnu bazu treba izbjegavati jer T.
dodatak1:Cell IzravnoRT-qPCR Sastavni dio kompletat dodatak pakiranju
1. Otopina za lizu stanica
| Otopina za lizu stanica | |||
| Komponente kompleta (sustav za lizu s 24 jažice / jažica) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Dioja | Međuspremnik CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Međuspremnik ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DioII | DNK brisač | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sustav) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mješavina | ||
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sustav) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referentna boja | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Priručnici s uputama:
