Cell Total RNA Isolation Kit Kompleti za pročišćavanje potpune RNA izolacije iz stanice
Opis kompleta:
Visoko pročišćena i visokokvalitetna ukupna RNA može se dobiti iz različitih uzgojenih stanica u 11 minuta.
Bez RNaze
Radi na sobnoj temperaturi (15-25 ℃)
Sa stupcem za čišćenje DNK
Visoki prinos RNA
Brzo: Završite ekstrakciju za 11 minuta
Sigurnost: Nema organske kemikalije
Opis
Ovaj komplet koristi spin kolonu i formulu koju je razvio Foregene, koja može učinkovito ekstrahirati ukupnu RNK visoke čistoće i kvalitete iz stanica uzgojenih u pločama s 96, 24, 12 i 6 jažica.
Komplet pruža učinkovitu kolonu za čišćenje DNK, koja može lako odvojiti supernatant i stanični lizat, vezati i ukloniti genomsku DNK.Operacija je jednostavna i štedi vrijeme.
TKolona samo za RNA može učinkovito vezati RNA jedinstvenom formulom.Veliki broj uzoraka može se obrađivati istovremeno.
Komponente kompleta
| Sastav kompleta | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Međuspremnik cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Međuspremnik cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Međuspremnik RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Međuspremnik RW2 | 24 mL | 96 mL |
| ddH2O bez RNaze | 10 mL | 40 mL |
| Stupac samo RNA | 50 | 200 |
| Kolona za čišćenje DNK | 50 | 200 |
| Uputa | 1 | 1 |
* Molimo nosite rukavice i poduzmite zaštitne mjere tijekom rada jer pufer cRL1 i pufer RW1 sadrže iritirajuće kaotropne soli.
Značajke i prednosti
■ Cijeli proces odvija se na sobnoj temperaturi (15-25 ℃), bez ledene kupelji i centrifugiranja na niskoj temperaturi.
■ Cijeli komplet je bez RNaze, nema potrebe brinuti o degradaciji RNK.
■ DNA-Cleaning Column specifično veže DNA, tako da kit može ukloniti kontaminaciju genomske DNA bez dodavanja dodatne DNAze.
■ Visoki prinos RNA: Kolona samo za RNA i jedinstvena formula mogu učinkovito pročistiti RNA.
■ Velika brzina: jednostavan za rukovanje i može se završiti za 11 minuta.
■ Sigurnost: Nije potreban organski reagens.
■ Visoka kvaliteta: Pročišćena RNA je visoke čistoće, bez proteina i drugih nečistoća, i može zadovoljiti razne naknadne eksperimente.
Primjena kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA iz uzgojenih stanica u pločama s 96, 24, 12 i 6 jažica.
Tijek rada
Dijagram
Baterijski dijagram agaroznog gela Cell Total RNA Isolation Kit tretirao je gore navedeni različiti broj stanica, 20 μl volumena elucije, uzmite 2 μl pročišćene ukupne RNA 1%.
Skladištenje i rok trajanja
Komplet se može čuvati 12 mjeseci na sobnoj temperaturi (15–25 ℃) ili 2–8 ℃ duže vrijeme (24 mjeseca).
Pufer cRL1 može se pohraniti na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja 2-hidroksi-1-etantiola (po izboru).
RNA nije ekstrahirana ili su prinosi RNA niski
Često postoje različiti čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNA u uzorku tkiva, način rada, volumen elucije itd.
1. Tijekom rada provedena je ledena kupelj ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje.
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25 °C) tijekom cijelog procesa, ne koristite ledenu kupku i centrifugirajte na niskim temperaturama.
2. Nepravilno čuvanje uzorka ili predugo vrijeme čuvanja uzorka.
Preporuka: Pohranite uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovljenu upotrebu zamrzavanjem-otapanjem;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.
3. Nedovoljna liza uzorka.
Preporuka: Prilikom homogeniziranja tkiva, osigurajte da je tkivo dovoljno homogenizirano i da su stanice tkiva dovoljno podijeljene da bi se objasnilo oslobađanje RNK.
4. Eluens nije pravilno dodan.
Preporuka: potvrdite da je ddH bez RNaze2O se dodaje kap po kap u sredinu membrane kolone za pročišćavanje.
5. Točan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer RL2 ili pufer RW2.
Preporuka: Slijedite upute, dodajte točan volumen apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Doziranje uzorka tkiva nije odgovarajuće.
Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 106stanica po 500 μl pufera RL1, budući da pretjerana uporaba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNA.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Preporuka: Volumen eluacije kolone za pročišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja puferom RW2.
Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugirajte praznu epruvetu 1 minutu, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.
Pročišćena RNA se razgrađuje
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNazom i manipulacija, itd.
1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili stanice ne iskoriste na vrijeme nakon prikupljanja, odmah ih kriokonzervirajte na -80 °C ili u tekućem dušiku.Za izdvajanje RNK, upotrijebite tek uzeti uzorak tkiva ili stanice kad god je to moguće.
2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Kada pohranjujete uzorke tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja i ukloniti jedan od dijelova kada ih koristite kako biste izbjegli ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i razgradnju RNK.
3. RNaza se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tijekom operacije.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim sobama za manipulaciju RNK, a stol se očisti prije eksperimenta.
Nosite jednokratne rukavice i maske tijekom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNaze.
4. Reagensi su kontaminirani RNazom tijekom upotrebe.
Preporuka: Zamijenite novim Kompletom za izolaciju ukupne životinjske RNA za povezane pokuse.
5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u manipulaciji RNK kontaminirani su RNazom.
Preporuka: potvrdite da epruvete za centrifugiranje, vrhovi, pipete itd. koji se koriste u ekstrakciji RNA ne sadrže RNaze.
Pročišćena dobivena RNA utječe na nizvodne eksperimente
RNA pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je sadržaj iona soli, proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluirana RNA ima ostatke iona soli.
Preporuka: potvrdite da je točan volumen etanola dodan u pufer RW2 i izvedite 2 ispiranja kolone za pročišćavanje centrifugalnom brzinom naznačenom za rad;ako ima ostataka iona soli, ostavite kolonu za pročišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.
2. Ostatak etanola u eluiranoj RNA.
Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete brzinom centrifugiranja navedenom za rad, produžite vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 m
