Plant Total RNA Isolation Kit Total RNA Purificaiton Kit za biljke s niskim udjelom polisaharida i polifenola
Tehnički podaci
50 priprema, 200 priprema
Komplet koristi spin kolonu i formulu koju je razvio Foregene, koja može učinkovito ekstrahirati ukupnu RNA visoke čistoće i kvalitete iz različitih biljnih tkiva s niskim sadržajem polisaharida i polifenola.Za uzorke biljaka s visokim udjelom polisaharida ili polifenola, preporuča se koristiti Plant Total RNA Isolation Plus Kit za bolje rezultate ekstrakcije RNA.Komplet sadrži kolonu za čišćenje DNK koja može lako ukloniti genomsku DNK iz supernatanta i lizata tkiva.Kolona koja sadrži samo RNA može učinkovito vezati RNA.Komplet može obraditi veliki broj uzoraka u isto vrijeme.
Cijeli sustav ne sadrži RNazu, tako da se pročišćena RNA neće razgraditi.Pufer PRW1 i pufer PRW2 mogu osigurati da dobivena RNA nije kontaminirana proteinima, DNA, ionima i organskim spojevima.
Komponente kompleta
| Međuspremnik PSL1, međuspremnik PS, međuspremnik PSL2 |
| Međuspremnik PRW1, međuspremnik PRW2 |
| ddH bez RNaze2O, kolona za čišćenje DNK |
| Stupac samo RNA |
| upute |
Značajke i prednosti
■ Rad na sobnoj temperaturi (15-25 ℃) tijekom cijelog procesa, bez ledene kupelji i centrifugiranja na niskoj temperaturi.
■ Kompletan komplet Bez RNaze, nema potrebe brinuti o degradaciji RNK.
■ DNA-Cleaning Column specifično se veže za DNA, tako da kit može ukloniti kontaminaciju genomske DNA bez dodavanja DNAze.
■ Visoki prinos RNA: Kolona samo za RNA i jedinstvena formula mogu učinkovito pročistiti RNA.
■ Velika brzina: jednostavan za rukovanje i može se završiti u roku od 30 minuta.
■ Sigurnost: nije potreban organski reagens.
■ Visoka kvaliteta: pročišćeni RNA fragmenti su visoke čistoće, bez proteina i drugih nečistoća i mogu zadovoljiti razne daljnje eksperimentalne primjene.
Primjena kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA iz svježih ili smrznutih uzoraka biljnog tkiva (osobito svježeg lisnog tkiva) s niskim sadržajem polisaharida i polifenola.
Tijek rada
Dijagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus obradio je 50 mg svježih listova polisaharida i polifenola, a 5% pročišćene RNA testirano je elektroforezom.
1: Banana
2: Ginko
3: Pamuk
4: Nar
Skladištenje i rok trajanja
Komplet se može čuvati 12 mjeseci na sobnoj temperaturi (15–25 ℃) u suhom okruženju, a 2–8 ℃ duže vrijeme (24 mjeseca).
Pufer PSL1 može se pohraniti na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja 2-hidroksi-1-etantiola (po izboru).
Vodič za analizu problema
Sljedeća analiza problema na koje možete naićiBiljka UkupnoRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Kolona centrifuge je začepljena
Blokada spin kolone uzrokovat će smanjenje prinosa RNA ili čak nemogućnost pročišćavanja da bi se dobila RNA, a kvaliteta dobivene RNA bit će niska.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Uzorak nije potpuno slomljen.
Nepotpuna fragmentacija uzorka može blokirati kolonu za čišćenje DNK, što također može utjecati na prinos i kvalitetu RNK.Preporučujemo da prilikom izvođenja fragmentacije uzorka brzo usitnite dovoljne količine tekućeg dušika kako biste što više razbili tkiva kao što su stanične stijenke i stanične membrane uzoraka.Za biljne uzorke polifenol polisaharida preporučujemo da koristite Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Aspirirajte izolirani supernatant DNA-Cleaning Column, aspirirajte mogući talog ostataka stanica.
Aspirirani talog staničnih ostataka može začepiti kolonu samo za RNA tijekom postupaka adsorpcije RNA (pogledajte korak 5 postupka, korak 6 postupka s polisaharidnim polifenolom).Preporučujemo da budete oprezni prilikom aspiracije ovog supernatanta kako biste izbjegli aspiraciju ostataka stanica.
3. Početna količina uzorka je prevelika.
Pretjerana upotreba uzorka rezultirat će nepotpunom fragmentacijom uzorka ili nepotpunom lizom stanica puferom PRL1 ili puferom PSL1, što će rezultirati začepljenom kolonom za pročišćavanje za operacije pročišćavanja.Plant Total RNA Isolation Kit ima početni maksimum od 50 mg po jednom pročišćavanju obrađenog uzorka.Za biljne uzorke polifenol polisaharida preporučujemo da isprobate Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Temperatura centrifuge je preniska.
Izolacija cijele RNA i pročišćavanje, osim razaranja uzorka tkiva tekućim dušikom, svi se koraci izvode na sobnoj temperaturi (20-25 °C).Neke niskotemperaturne centrifuge imaju temperature ispod 20 °C, što može uzrokovati začepljenja u koloni za čišćenje DNA i/ili koloni samo za RNA.Ako se to dogodi, postavite temperaturu centrifuge na 20-25 °C i prethodno zagrijte smjesu za lizu i/ili dodatak supernatanta za odvajanje etanola na 37 °C.
RNK nije ekstrahirana ili je prinos RNK nizak
Obično postoje mnogi čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNK u uzorku, metoda rada, volumen eluacije itd.
Analiza uobičajenih uzroka kao u nastavku:
1. Tijekom operacije provedena je kupka s ledom ili centrifugiranje na niskoj temperaturi (4°C).
Prijedlog: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) tijekom cijelog postupka, nemojte raditi kupku s ledom i centrifugiranje na niskoj temperaturi.
2.RNK je degradirana zbog nepravilnog čuvanja uzorka ili dugotrajnog čuvanja uzorka.
Preporuka: Svježe prikupljene uzorke treba brzo zamrznuti u tekućem dušiku, a zatim pohraniti na -80°C dulje vrijeme, izbjegavati ponovno zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka;ili odmah potopiti uzorke u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (uzorci životinja).
3.Nedovoljna fragmentacija uzorka i liza dovode do začepljenja kolone za pročišćavanje.
Prijedlog: Prilikom mljevenja tkiva, provjerite je li tkivo dovoljno samljeveno i brzo ga prebacite u prethodno pripremljeni pufer PSL1 (potvrdite da je dodan točan udio β-ME, pogledajte korak 1 postupka).
4. Eluens je netočno dodan.
Prijedlog: Provjerite je li ddH bez RNaze2O se ukapa u sredinu membrane kolone za pročišćavanje.
5. Točan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer PSL2 ili pufer PRW2.
Prijedlog: Slijedite upute, dodajte točan volumen apsolutnog etanola u pufer PSL2 i pufer PRW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Količina uzorka tkiva je neprikladna.
Prijedlog: Koristite 50 mg tkiva na 500 μl pufera PSL1.Korištenje previše tkiva smanjit će količinu ekstrahirane RNA, a čistoća dobivene RNA također će biti smanjena.Toplo preporučujemo da početna doza uzorka ne smije premašiti 50 mg po operaciji ekstrakcije RNK.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Prijedlog: Volumen eluensa kolone za pročišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja puferom PRW2.
Prijedlog: Ako se prazna epruveta centrifugira 1 minutu i još uvijek ima preostalog etanola nakon ispiranja u puferu PRW2, možete produljiti vrijeme centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ili staviti kolonu za pročišćavanje na sobnu temperaturu na 5 minuta kako biste u potpunosti uklonili zaostali etanol.
9. Komplet je korišten neispravno.
Prijedlog: Za biljne uzorke polifenolnih polisaharida korištenjem uobičajenih kompleta kao što je Plant Total RNA Isolation Kit možda nećete moći dobiti idealne uzorke RNA.Preporučujemo da koristite Plant Total RNA IsolationKit Plus, koji je posebno dizajniran za polifenolne polisaharide biljnih uzoraka.Komplet posebno razvijen za ekstrakciju RNA iz biljnih uzoraka polifenola i polisaharida.
Vrijednost OD260/OD280 je niska
RNA elucija s ddH2O i korišten za očitanja spektrofotometra rezultira niskim vrijednostima OD260/OD280.Preporučujemo korištenje 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (umjesto ddH bez RNaze2O za eluiranje RNA) za dobivanje relativno točnih vrijednosti OD260/OD280, pogledajte “Analize koncentracije i pročišćavanja RNA” na stranici 19.
Pročišćena RNA se razgrađuje
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNazom i manipulacija.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Uzorci tkiva nisu pohranjeni na vrijeme nakon prikupljanja.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ne iskoriste na vrijeme nakon prikupljanja, odmah ih pohranite u tekući dušik na niskoj temperaturi ili ih nakon brzog smrzavanja u tekućem dušiku prebacite na -80°C radi dugotrajnog skladištenja ili uzorke odmah uronite u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (uzorci životinja).Za ekstrakciju RNK pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke tkiva.
2. Ponavljano zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka tkiva.
Prijedlog: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a dio ih izvaditi prilikom upotrebe kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana opetovanim zamrzavanjem i odmrzavanjem uzoraka.
3. RNaza se unosi u operacijskoj sali ili se ne nose jednokratne rukavice, maske i sl.
Prijedlog: Pokuse ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim operacijama RNK, a laboratorijski stol treba očistiti prije eksperimenta, a tijekom eksperimenta treba nositi jednokratne rukavice i maske kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana uvođenjem RNaze u najvećoj mjeri.
4. Reagens je kontaminiran RNazom tijekom upotrebe.
Prijedlog: Zamijenite novom serijom kompleta za ekstrakciju ukupne biljne RNK za srodne eksperimente.
5. Centrifugalne epruvete i vrhovi pipeta koji se koriste za manipulaciju RNK kontaminirani su RNazom.
Prijedlog: Provjerite jesu li epruvete za centrifugiranje, vrhovi pipeta, pipete itd. koji se koriste u ekstrakciji RNA bez RNaze.
Priručnici s uputama:
