Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit za biljke bogate polisaharidima i polifenolima
Opis kompleta:
Kat.br.RE-05021/05022/05024
Za pročišćavanje ukupne RNA iz općih biljnih uzoraka koji sadrže visoke komponente polisaharida i polifenola.
Brzo ekstrahirajte visokokvalitetnu ukupnu RNA iz biljnih uzoraka s visokim sadržajem polisaharida i polifenola.
Bez RNaze pomoću kolone za čišćenje DNA
Jednostavno—sve operacije se dovršavaju na sobnoj temperaturi
Brzo—operacija se može završiti za 30 minuta
Sigurno—ne koriste se organski reagensi 
Tehnički podaci
50 priprema, 200 priprema
Komplet koristi spin kolonu i formulu koju je razvio Foregene, koja može učinkovito ekstrahirati ukupnu RNK visoke čistoće i kvalitete iz različitih biljnih tkiva s visokim sadržajem polisaharida ili polifenola.Omogućuje kolonu za čišćenje DNK koja može lako ukloniti genomsku DNK iz supernatanta i lizata tkiva.Kolona koja sadrži samo RNA može učinkovito vezati RNA.Komplet može obraditi veliki broj uzoraka u isto vrijeme.
Cijeli sustav ne sadrži RNazu, tako da se pročišćena RNA neće razgraditi.Pufer PRW1 i pufer PRW2 mogu osigurati da dobivena RNA nije kontaminirana proteinima, DNA, ionima i organskim spojevima.
Komponente kompleta
| Međuspremnik PSL1, međuspremnik PS, međuspremnik PSL2 |
| Međuspremnik PRW1, međuspremnik PRW2 |
| ddH bez RNaze2O, kolona za čišćenje DNK |
| Stupac samo RNA |
Značajke i prednosti
■ Rad na sobnoj temperaturi (15-25 ℃) tijekom cijelog procesa, bez ledene kupelji i centrifugiranja na niskoj temperaturi.
■ Kompletan komplet Bez RNaze, nema potrebe brinuti o degradaciji RNK.
■ Posebno pogodan za pročišćavanje RNA iz biljnih uzoraka polisaharida i polifenola.
■ DNA-Cleaning Column specifično se veže za DNA, tako da kit može ukloniti kontaminaciju genomske DNA bez dodavanja DNAze.
■ Visoki prinos RNA: Kolona samo za RNA i jedinstvena formula mogu učinkovito pročistiti RNA.
■ Velika brzina: jednostavan za rukovanje i može se završiti u roku od 30 minuta.
■ Sigurnost: nije potreban organski reagens.
■ Visoka kvaliteta: pročišćeni RNA fragmenti su visoke čistoće, bez proteina i drugih nečistoća i mogu zadovoljiti razne daljnje eksperimentalne primjene.
Parametri proizvoda
■ Primjene nizvodno: sinteza prvog lanca cDNA, RT-PCR, molekularno kloniranje, Northern Blot, itd.
■ Uzorak: Svježa ili smrznuta biljna tkiva polisaharida i polifenola
■ Doziranje: 50mg biljnog tkiva
■ Maksimalni kapacitet vezanja RNA kolone za pročišćavanje: 80 μg
■ Volumen eluacije: 50-200 μl
Primjena kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA iz svježih ili smrznutih uzoraka biljnog tkiva (osobito svježeg lisnog tkiva) s visokim sadržajem polisaharida i polifenola.
Tijek rada
Dijagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus obradio je 50 mg svježih listova polisaharida i polifenola, a 5% pročišćene RNA testirano je elektroforezom.
1: Banana
2: Ginko
3: Pamuk
4: Nar
Skladištenje i rok trajanja
Ovaj komplet može se čuvati 24 mjeseca u suhim uvjetima na sobnoj temperaturi (15-25 ℃);ako je potrebno čuvati dulje vrijeme, može se čuvati na 2–8 ℃.
Pufer PSL1 može se staviti na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja β-merkaptoetanola (preporuča se dodati ga u isto vrijeme eksperimenta).
Kolona začepljena
Nakon što se kolona začepi, prinos RNA je smanjen ili čak nemoguće pročistiti RNA, a dobivena RNA masa je mala.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Prekidi uzorka nisu temeljiti.
Lom uzorka ne uzrokuje potpuno blokiranje DNA-CLEANING COLUMN, ali utječe na prinos i kvalitetu RNA.Preporučujemo brzo mljevenje u dovoljnoj količini tekućeg dušika kada razbijete uzorke. Pokušajte zgnječiti staničnu stijenku uzorka, staničnu membranu i drugo tkivo.Za biljne uzorke poliol polisaharida preporučujemo da koristite Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Kada se usisava odvojeni supernatant uzorka s DNA-Cleaning Column, mogući talog fragmentiranih stanica može se udahnuti.
Uzeti stanični fragmentirani sedimenti uzrokovat će kolonu SAMO RNA koja će biti blokirana kada se izvrši operacija adsorpcije RNA (pogledajte korak 6).Preporučujemo da pažljivo usisavate ovaj supernatant kako biste izbjegli usisavanje ostataka stanica.
3. Početna količina uzorka je prevelika.
Pretjerana upotreba uzorka rezultirat će nepotpunom fragmentacijom uzorka ili nepotpunom lizom stanica puferom PSL1, što će rezultirati blokadom kolone za pročišćavanje tijekom pročišćavanja.Komplet za izolaciju ukupne biljne RNK Svaki pojedinačni pročišćeni operativni uzorak iznosi 50 mg.Za biljne uzorke poliol polisaharida preporučujemo da isprobate Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Temperatura centrifuge je preniska.
Cijeli proces izolacije i pročišćavanja RNA provodi se na sobnoj temperaturi (20-25°C), osim što je tkivo uzorka razbijeno tekućim dušikom. Temperatura nekih kriogenih centrifuga niža je od 20℃, što može uzrokovati blokadu kolone za čišćenje DNA i/ili kolone samo za RNA.Ako se to dogodi, postavite temperaturu centrifuge na 20-25℃, iprovjerite jesu li smjesa za lizu i/ili supernatant s dodatkom etanola prethodno zagrijani na 37°C.
RNK nije ekstrahirana ili je prinos RNK nizak
Obično postoje mnogi čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNK u uzorku, metoda rada, volumen eluacije itd.
Analiza uobičajenih uzroka kao u nastavku:
1. Tijekom operacije provedena je kupka s ledom ili centrifugiranje na niskoj temperaturi (4°C).
Prijedlog: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) u cijelom procesu nemojte raditi ledenu kupelj i centrifugiranje na niskoj temperaturi.
2. RNK je degradirana zbog nepravilnog čuvanja uzorka ili dugotrajnog čuvanja uzorka.
Preporuka: Svježe prikupljene uzorke treba brzo zamrznuti u tekućem dušiku, a zatim pohraniti na -80°C dulje vrijeme, izbjegavati ponovno zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka;ili odmah potopiti uzorke u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (uzorci životinja).
3. Nedovoljna fragmentacija uzorka i liza dovode do začepljenja kolone za pročišćavanje.
Prijedlog: Prilikom mljevenja tkiva, provjerite je li tkivo dovoljno samljeveno i brzo ga prebacite u prethodno pripremljeni pufer PSL1 (potvrdite da je dodan točan udio β-ME, pogledajte korak 1 postupka).
4. Eluens je netočno dodan.
Prijedlog: Provjerite je li ddH2O bez RNaze kapnut u sredinu membrane kolone za pročišćavanje.
5. Točan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer PSL2 ili pufer PRW2.
Prijedlog: Slijedite upute, dodajte točan volumen apsolutnog etanola u pufer PSL2 i pufer PRW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Količina uzorka tkiva je neprikladna.
Prijedlog: Koristite 50 mg tkiva na 500 μl pufera PSL1.Korištenje previše tkiva smanjit će količinu ekstrahirane RNA, a čistoća dobivene RNA također će biti smanjena.Toplo preporučujemo da početna doza uzorka ne smije premašiti 50 mg po operaciji ekstrakcije RNK.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Prijedlog: Volumen eluensa kolone za pročišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH2O bez RNaze, na primjer 5-10 min.
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja puferom PRW2.
Prijedlog: Ako se prazna epruveta centrifugira 1 minutu i još uvijek ima preostalog etanola nakon ispiranja u puferu PRW2, možete produljiti vrijeme centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ili staviti kolonu za pročišćavanje na sobnu temperaturu na 5 minuta kako biste u potpunosti uklonili zaostali etanol.
9. Komplet je korišten neispravno.
Prijedlog: Za biljne uzorke polifenolnih polisaharida korištenjem uobičajenih kompleta kao što je Plant Total RNA Isolation Kit možda nećete moći dobiti idealne uzorke RNA.Preporučujemo da koristite Plant Total RNA IsolationKit Plus, koji je posebno dizajniran za polifenolne polisaharide biljnih uzoraka.Komplet posebno razvijen za ekstrakciju RNA iz biljnih uzoraka polifenola i polisaharida.
Vrijednost OD260/OD280 je niska
Ispiranje RNA s ddH2O i korištenje za očitanja na spektrofotometru rezultira niskim vrijednostima OD260/OD280.Preporučamo korištenje 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (umjesto ddH2O bez RNaze za eluiranje RNA) za dobivanje relativno točnih vrijednosti OD260/OD280, pogledajte “Analize koncentracije i pročišćavanja RNA” na stranici 19.
Pročišćena RNA se razgrađuje
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNazom i manipulacija.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Uzorci tkiva nisu pohranjeni na vrijeme nakon prikupljanja.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ne iskoriste na vrijeme nakon prikupljanja, odmah ih pohranite u tekući dušik na niskoj temperaturi ili ih nakon brzog smrzavanja u tekućem dušiku prebacite na -80°C radi dugotrajnog skladištenja ili uzorke odmah uronite u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (uzorci životinja).Za ekstrakciju RNK pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke tkiva.
2. Ponavljano zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka tkiva.
Prijedlog: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a dio ih izvaditi prilikom upotrebe kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana opetovanim zamrzavanjem i odmrzavanjem uzoraka.
3. RNaza se unosi u operacijskoj sali ili se ne nose jednokratne rukavice, maske i sl.
Prijedlog: Pokuse ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim operacijama RNK, a laboratorijski stol treba očistiti prije eksperimenta, a tijekom eksperimenta treba nositi jednokratne rukavice i maske kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana uvođenjem RNaze u najvećoj mjeri.
4. Reagens je kontaminiran RNazom tijekom upotrebe.
Prijedlog: Zamijenite novom serijom kompleta za ekstrakciju ukupne biljne RNK za srodne eksperimente.
5. Centrifugalne epruvete i vrhovi pipeta koji se koriste za manipulaciju RNK kontaminirani su RNazom.
Prijedlog: Provjerite jesu li epruvete za centrifugiranje, vrhovi pipeta, pipete itd. koji se koriste u ekstrakciji RNA bez RNaze.
Priručnici s uputama:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus priručnik s uputama
