PCR u stvarnom vremenu Easyᵀᴹ-Taqman
Opisi kompleta
2X pravi PCR jednostavanTMMix-Taqman pruža Real Time PCR EasyTM-Taqman kit je novi sustav premiksa koji koristi specifične fluorescentne sonde za reakcije amplifikacije PCR u stvarnom vremenu, što može uvelike poboljšati specifičnost proizvoda i osjetljivost reakcije.ROX se isporučuje kao unutarnja kontrolna boja.
2X pravi PCR jednostavanTMMix-Taqman sadrži Foregene jedinstvenu Taq DNA polimerazu za vrući početak.U usporedbi s običnim Taq enzimima, ima prednosti visoke učinkovitosti pojačanja, snažne specifične sposobnosti pojačanja i niske stope neusklađenosti.Može smanjiti nespecifično pojačanje i poboljšati točnost PCR-a.
Tehnički podaci
Jednostavan PCR u stvarnom vremenuTM-Taqman | ||||
Sastav kompleta (sustav od 20 μl) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Pravi PCRLakoTMMiješati-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX referentna boja | 200 μl | 0,5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
ddH bez DNaze2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Iuputa | 1 | 1 | 1 | 1 |
Značajke i prednosti
■ Jednostavno—2X PCR mješavina za smanjenje eksperimentalne pogreške i vremena rada
■ Specifičan—optimizirani pufer i Taq enzim za vrući početak mogu spriječiti nespecifično pojačanje i stvaranje dimera početnika
■ Visoka osjetljivost—može otkriti male kopije predloška
■ Dobra svestranost—kompatibilan s većinom kvantitativnih PCR instrumenata u stvarnom vremenu
Primjena kompleta
qPCR analiza
Tijek rada
Grafički
Skladištenje i rok trajanja
Ovaj komplet treba čuvati dalje od svjetlosti i treba ga čuvati na -20 ℃.Ako se često koristi, također se može čuvati na 4 ℃ kratko vrijeme (10 dana).
Nema pojačanja signala
1. Taq DNA polimeraza u kompletu gubi svoju aktivnost zbog nepravilnog skladištenja ili isteka roka trajanja kompleta.
Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja kompleta;ponovno dodajte odgovarajuću količinu Taq DNA polimeraze u PCR sustav ili kupite novi Real Time PCR komplet za povezane eksperimente.
2. Postoji mnogo inhibitora Taq DNA polimeraze u DNA šabloni.
Prijedlog: Ponovo pročistite predložak ili smanjite količinu korištenog predloška.
3. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ u 2× Real PCR mješavini koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.
4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.
5. Količina predloška je premala ili prevelika.
Preporuka: Izvršite gradijent linearizacije predloška i odaberite koncentraciju predloška s najboljim PCR učinkom za PCR eksperiment u stvarnom vremenu.
NTC ima previsoku vrijednost fluorescencije
1. Kontaminacija reagensa uzrokovana tijekom rada.
Preporuka: Zamijenite novim reagensima za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
2. Do kontaminacije je došlo tijekom pripreme PCR reakcijskog sustava.
Preporuka: Poduzmite potrebne zaštitne mjere tijekom rada, kao što su: nošenje rukavica od lateksa, korištenje vrha pipete s filtrom itd.
3. Početnice se razgrađuju, a razgradnja početnica će uzrokovati nespecifično pojačanje.
Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
Primer dimera ili nespecifična amplifikacija
1. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ u mješavini 2× Real PCR EasyTM koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.
2. Temperatura PCR žarenja je preniska.
Prijedlog: Povećajte temperaturu žarenja PCR-a za 1 ℃ ili 2 ℃ svaki put.
3. PCR proizvod je predug.
Preporuka: Duljina proizvoda PCR u stvarnom vremenu trebala bi biti između 100-150 bp, ne više od 500 bp.
4. Primeri se razgrađuju, a razgradnja početnica će dovesti do pojave specifične amplifikacije.
Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.
Loša ponovljivost kvantitativnih vrijednosti
1. Instrument je u kvaru.
Prijedlog: Mogu postojati pogreške između svake PCR rupe instrumenta, što rezultira slabom obnovljivošću tijekom upravljanja temperaturom ili detekcije.Provjerite prema uputama odgovarajućeg instrumenta.
2. Čistoća uzorka nije dobra.
Preporuka: Nečisti uzorci dovest će do loše ponovljivosti eksperimenta, što uključuje čistoću šablona i primera.Najbolje je ponovno pročistiti predložak, a početnice je najbolje pročistiti SDS-PAGE.
3. Vrijeme pripreme i čuvanja PCR sustava je predugo.
Prijedlog: Koristite Real Time PCR sustav za PCR eksperiment odmah nakon pripreme i ne ostavljajte ga predugo.
4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.
5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.