• facebook
  • linkedin
  • youtube
stranica_banner

Foreasy HS Taq DNA polimeraza

Opis kompleta:

Visoka specifičnost: Enzim s visokom aktivnošću vrućeg pokretanja.

Brzo pojačanje: 10 sek/kb.

Visoka prilagodljivost predloška: može se koristiti za učinkovito pojačavanje HighGCvrijednostirazne DNA šablone koje je teško pojačati.

Jaka vjernost: Vjernost je 6 putaof obični enzim Taq.

foregene snaga


Pojedinosti o proizvodu

Oznake proizvoda

Pitanja

Opis

Foreasy HS Taq DNA polimeraza je novi Taq enzim koji se eksprimira u Escherichia coli inženjerskoj bakteriji tehnologijom rekombinacije gena.Nakon što se enzim tretira posebnim postupkom, on'Njegova aktivnost je inhibirana prije toplinske aktivacije, čime se inhibira nespecifična amplifikacija uzrokovana nespecifičnim žarenjem početnica ili dimera početnica u uvjetima niske temperature.Ovaj proizvod je prikladan za visoko specifičan PCR Reaction, M višestruki x PCR , visok sadržaj GC (> 60%) ,ssekundarna strukturaili drugijaki pozadinski genomicspojačanje i genom velikih razmjeraicsotkrivanje pojačanja.Enzim ima aktivnost 5' → 3' DNA polimeraze i aktivnost 5' → 3' egzonukleaze, ali ne i aktivnost 3' → 5' egzonukleaze.

Komponente kompleta

komponenta IM-01021 IM-01022 IM-01023
Foreasy HS Taq DNA polimeraza (5 U/μL)  5000 U (1 mL)  50 KU (10 ml)  500 KU (100 ml)
2× Taq reakcijski pufer  25 ml × 5  250 mL × 5  500 mL × 25

Značajke i prednosti

- Visoka specifičnost: Enzim s visokom aktivnošću vrućeg pokretanja.

- Brzo pojačanje: 10 sek/kb.

- Visoka prilagodljivost predloška: može se koristiti za učinkovito pojačavanje HighGCvrijednostirazne DNA šablone koje je teško pojačati.

- Jaka vjernost: Vjernost je 6 putaof obični enzim Taq.

Primjena kompleta

- Razni PCR/qPCR sustavi i direktni PCR sustavi

- PCR amplificirani fragment DNA

- DNK oznaka

- Sekvenciranje DNK

- PCR plus A rep

Definicija aktivnosti

1U : Količina enzima potrebna za ugradnju 10 nmolDNKu tvar netopljivu u kiselini koristeći aktiviranu DNA sperme lososa kao predložak/primer, 74 °C, 30 minuta.

Stanje reakcije

Temperatura Vrijeme reakcije Vrijeme ciklusa
37°C 5 minuta 1
94°C 5 minuta 1
94°C 10 sekundi  40
60°C 10 sekundi

Bilješka:Za sustave od 10 µL i 20 µL, dodajte jednaku količinu mineralnog ulja ako termocikler nema poklopac za grijanje.

Uvjeti PCR reakcije variraju ovisno o strukturnim uvjetima šablona, ​​početnica i slično.U specifičnoj operaciji potrebno je dizajnirati optimalne reakcijske uvjete, uključujući temperaturu žarenja, vrijeme produženja, itd., u skladu sa specifičnim uvjetima kao što su tip predloška, ​​veličina ciljnog fragmenta, bazna sekvenca amplificiranog fragmenta i GC sadržaj i duljina primera.

Skladištenje

-20 ± 5 °C tijekom 2 godine ili na -80 °C za dugotrajno skladištenje.


  • Prethodna:
  • Sljedeći:

  • Nema pojačanja signala

    1. Taq DNA polimeraza u kompletu gubi svoju aktivnost zbog nepravilnog skladištenja ili isteka roka trajanja kompleta.
    Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja kompleta;ponovno dodajte odgovarajuću količinu Taq DNA polimeraze u PCR sustav ili kupite novi Real Time PCR komplet za povezane eksperimente.

    2. Postoji mnogo inhibitora Taq DNA polimeraze u DNA šabloni.
    Prijedlog: Ponovo pročistite predložak ili smanjite količinu korištenog predloška.

    3. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
    Preporuka: Koncentracija Mg2+ u 2× Real PCR mješavini koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.

    4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
    Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.

    5. Količina predloška je premala ili prevelika.
    Preporuka: Izvršite gradijent linearizacije predloška i odaberite koncentraciju predloška s najboljim PCR učinkom za PCR eksperiment u stvarnom vremenu.

    NTC ima previsoku vrijednost fluorescencije

    1. Kontaminacija reagensa uzrokovana tijekom rada.
    Preporuka: Zamijenite novim reagensima za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.

    2. Do kontaminacije je došlo tijekom pripreme PCR reakcijskog sustava.
    Preporuka: Poduzmite potrebne zaštitne mjere tijekom rada, kao što su: nošenje rukavica od lateksa, korištenje vrha pipete s filtrom itd.

    3. Početnice se razgrađuju, a razgradnja početnica će uzrokovati nespecifično pojačanje.
    Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.

    Primer dimera ili nespecifična amplifikacija

    1. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
    Preporuka: Koncentracija Mg2+ u mješavini 2× Real PCR EasyTM koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.

    2. Temperatura PCR žarenja je preniska.
    Prijedlog: Povećajte temperaturu žarenja PCR-a za 1 ℃ ili 2 ℃ svaki put.

    3. PCR proizvod je predug.
    Preporuka: Duljina proizvoda PCR u stvarnom vremenu trebala bi biti između 100-150 bp, ne više od 500 bp.

    4. Primeri se razgrađuju, a razgradnja početnica će dovesti do pojave specifične amplifikacije.
    Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.

    5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
    Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.

    Loša ponovljivost kvantitativnih vrijednosti

    1. Instrument je u kvaru.
    Prijedlog: Mogu postojati pogreške između svake PCR rupe instrumenta, što rezultira slabom obnovljivošću tijekom upravljanja temperaturom ili detekcije.Provjerite prema uputama odgovarajućeg instrumenta.

    2. Čistoća uzorka nije dobra.
    Preporuka: Nečisti uzorci dovest će do loše ponovljivosti eksperimenta, što uključuje čistoću šablona i primera.Najbolje je ponovno pročistiti predložak, a početnice je najbolje pročistiti SDS-PAGE.

    3. Vrijeme pripreme i čuvanja PCR sustava je predugo.
    Prijedlog: Koristite Real Time PCR sustav za PCR eksperiment odmah nakon pripreme i ne ostavljajte ga predugo.

    4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
    Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.

    5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
    Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.

    Ovdje napišite svoju poruku i pošaljite nam je