Foreasy Taq DNA polimeraza
Opis
Foreasy Taq DNA polimeraza je novi Taq enzim ekspresiran u Escherichia coli inženjering bakterija tehnologijom rekombinacije gena.Sam enzim ima određenu aktivnost vrućeg pokretanja i može se koristiti za konvencionalni PCR i qPCR;ima aktivnost 5'→3' DNA polimeraze i aktivnost 5'→3' egzonukleaze, ali nema aktivnost 3'→5' egzonukleaze.
Komponente kompleta
komponenta | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq DNA polimeraza(5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
2× Taq reakcijski pufer | 25 mL × 5 | 250 mL × 5 | 500 mL × 25 |
Značajke i prednosti
- Visoka specifičnost: Enzim ima određenu aktivnost vrućeg pokretanja.
- Brzo pojačanje: 10 s/kb.
- Visoko prilagodljivi predložak: može se koristiti za učinkovito pojačavanje GC Visoke vrijednosti, različiti DNK predlošci koje je teško pojačati.
- Jaka vjernost: obični Taq enzim 6 puta.
- Jaka toplinska stabilnost: Može se staviti na 37 °C tjedan dana i održava više od 90% aktivnosti
Primjena kompleta
Razni PCR/qPCR sustavi i direktni PCR sustavi
PCR amplifikacija fragmenata DNA
Označavanje DNA
Sekvenciranje DNA
PCR A-tailed
U Definicija
1U: Količina enzima potrebna za ugradnju 10 nmol deoksinukleotida u tvar netopljivu u kiselini korištenjem aktivirane DNA sperme lososa kao uzorka/primera tijekom 30 minuta na 74°C.
Stanje reakcije
Temperatura | Vrijeme | Ciklus |
37°C | 5 minuta | 1 |
94°C | 5 minuta | 1 |
94°C | 10 sekundi | 35 |
60°C | 10 sekundi | |
72°C | 20 s/kb | |
72°C | 2 minute | 1 |
Skladištenje
-20 ± 5 °C tijekom 2 godine ili na -80 °C za dugotrajno skladištenje.
Nema pojačanja signala
1. Taq DNA polimeraza u kompletu gubi svoju aktivnost zbog nepravilnog skladištenja ili isteka roka trajanja kompleta.
Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja kompleta;ponovno dodajte odgovarajuću količinu Taq DNA polimeraze u PCR sustav ili kupite novi Real Time PCR komplet za povezane eksperimente.
2. Postoji mnogo inhibitora Taq DNA polimeraze u DNA šabloni.
Prijedlog: Ponovo pročistite predložak ili smanjite količinu korištenog predloška.
3. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ u 2× Real PCR mješavini koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.
4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.
5. Količina predloška je premala ili prevelika.
Preporuka: Izvršite gradijent linearizacije predloška i odaberite koncentraciju predloška s najboljim PCR učinkom za PCR eksperiment u stvarnom vremenu.
NTC ima previsoku vrijednost fluorescencije
1. Kontaminacija reagensa uzrokovana tijekom rada.
Preporuka: Zamijenite novim reagensima za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
2. Do kontaminacije je došlo tijekom pripreme PCR reakcijskog sustava.
Preporuka: Poduzmite potrebne zaštitne mjere tijekom rada, kao što su: nošenje rukavica od lateksa, korištenje vrha pipete s filtrom itd.
3. Početnice se razgrađuju, a razgradnja početnica će uzrokovati nespecifično pojačanje.
Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
Primer dimera ili nespecifična amplifikacija
1. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ u mješavini 2× Real PCR EasyTM koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne primere i predloške, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete izravno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporuča se povećanje Mg2+ za 0,5 mM svaki put radi optimizacije.
2. Temperatura PCR žarenja je preniska.
Prijedlog: Povećajte temperaturu žarenja PCR-a za 1 ℃ ili 2 ℃ svaki put.
3. PCR proizvod je predug.
Preporuka: Duljina proizvoda PCR u stvarnom vremenu trebala bi biti između 100-150 bp, ne više od 500 bp.
4. Primeri se razgrađuju, a razgradnja početnica će dovesti do pojave specifične amplifikacije.
Prijedlog: Upotrijebite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete jesu li početnice degradirane i zamijenite ih novim početnicama za PCR eksperimente u stvarnom vremenu.
5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.
Loša ponovljivost kvantitativnih vrijednosti
1. Instrument je u kvaru.
Prijedlog: Mogu postojati pogreške između svake PCR rupe instrumenta, što rezultira slabom obnovljivošću tijekom upravljanja temperaturom ili detekcije.Provjerite prema uputama odgovarajućeg instrumenta.
2. Čistoća uzorka nije dobra.
Preporuka: Nečisti uzorci dovest će do loše ponovljivosti eksperimenta, što uključuje čistoću šablona i primera.Najbolje je ponovno pročistiti predložak, a početnice je najbolje pročistiti SDS-PAGE.
3. Vrijeme pripreme i čuvanja PCR sustava je predugo.
Prijedlog: Koristite Real Time PCR sustav za PCR eksperiment odmah nakon pripreme i ne ostavljajte ga predugo.
4. Uvjeti PCR amplifikacije nisu prikladni, a slijed početnica ili koncentracija nisu odgovarajući.
Prijedlog: potvrdite ispravnost slijeda početnice i da početnica nije degradirana;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i odgovarajuće prilagoditi koncentraciju primera.
5. Sustav PCR nije ispravan ili je sustav premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sustav je premalen uzrokovat će smanjenje točnosti detekcije.Najbolje je koristiti reakcijski sustav koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u stvarnom vremenu.