Vodiči za analizu problema

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Ne može se ekstrahirati RNA ili je prinos nukleinske kiseline nizak

Obično postoje mnogi čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNK u uzorku, način rada, volumen eluacije itd.

Analiza uobičajenih uzroka:

1. Ledena kupka ili centrifugiranje na niskoj temperaturi (4 °C) tijekom rada.

Prijedlog: rad na sobnoj temperaturi (15-25 °C), nikad ledena kupka i centrifuga na niskoj temperaturi.

2. Nepravilno skladištenje uzorka ili predugo čuvanje uzorka.

Prijedlog: Čuvajte uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovljenu upotrebu zamrzavanjem-otapanjem;pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke za ekstrakciju RNA.

3. Nedovoljna liza uzorka

Preporuka: Provjerite jesu li uzorak i radna otopina (linearni akrilamid) temeljito promiješani i inkubirani 10 minuta na sobnoj temperaturi (15-25 °C)

4. Eluens je neispravno dodan

Preporuka: Provjerite je li ddH2O bez RNaze dodan u sredinu membrane kolone za pročišćavanje

5. Neodgovarajući volumen bezvodnog etanola u puferu viRW2

Prijedlozi: Slijedite upute, dodajte točan volumen bezvodnog etanola u pufer viRW2 i dobro ih promiješajte prije upotrebe pribora.

6. Nepravilna uporaba uzorka.

Prijedlog: 200 µl uzorka na 500 µl pufera viRL.Prevelik volumen uzorka rezultirat će smanjenom brzinom ekstrakcije RNK.

7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.

Prijedlog: Volumen eluenta kolone za pročišćavanje je 30-50 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se dodati prethodno zagrijani ddH bez RNaze₂O i produžite vrijeme stavljanja na sobnu temperaturu, npr. 5-10 min

8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja u puferu viRW2.

Prijedlog: Ako etanol još uvijek ostaje nakon ispiranja u puferu viRW2 i centrifugiranja u praznoj epruveti tijekom 2 minute, kolona za pročišćavanje može se ostaviti na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja u praznoj epruveti kako bi se u potpunosti uklonio preostali etanol.

Razgradnja pročišćenih molekula RNA

Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su skladištenje uzorka, kontaminacija RNazom i rad.

Analiza uobičajenih uzroka:

1. Prikupljeni uzorci nisu spremljeni na vrijeme.

Prijedlog: Ako se uzorak ne upotrijebi na vrijeme nakon uzimanja, odmah ga pohranite na -80 ℃ ili u tekućem dušiku.Za ekstrakciju RNA molekula pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke kad god je to moguće.

2. Prikupljeni uzorci su se opetovano zamrzavali i odmrzavali.

Prijedlog: Izbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje (ne više od jednom) tijekom prikupljanja i pohranjivanja uzorka, inače će se prinos nukleinske kiseline smanjiti.

3. RNaza je uvedena u operacijsku salu ili nisu nošene jednokratne rukavice, maske itd.

Prijedlog: Pokus ekstrakcije RNA molekula najbolje je izvesti u zasebnoj RNA operacijskoj sobi, a pokusni stol očistiti prije pokusa.Nosite jednokratne rukavice i maske tijekom eksperimenta kako biste izbjegli degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNaze.

4. Reagens je kontaminiran RNazom tijekom upotrebe.

Prijedlog: Zamijenite novim kompletom za izolaciju virusne RNK za povezane pokuse.

5. Kontaminacija centrifugalnih epruveta, vrhova pipeta itd. Rnazom. Prijedlog: Provjerite jesu li epruvete centrifuge, vrhovi pipeta i pipete bez RNaze.

Pročišćene molekule RNA utjecale su na nizvodne eksperimente

Molekule RNA pročišćene kolonom za pročišćavanje utjecat će na nizvodne eksperimente ako ima previše iona soli ili proteina, kao što su: reverzna transkripcija, Northern Blot, itd.

1. Postoje preostali ioni soli u eluiranim molekulama RNA.

Preporuka: Provjerite je li točan volumen bezvodnog etanola dodan u pufer viRW2 i dvaput operite kolonu za pročišćavanje u skladu s ispravnom brzinom centrifugiranja u uputama za rad；Ako još ima preostalih iona soli, možete dodati pufer viRW2 u kolonu za pročišćavanje i ostaviti je na sobnoj temperaturi 5 minuta.Zatim izvedite centrifugiranje kako biste u što većoj mjeri uklonili kontaminaciju ionima soli

2. Postoji preostali etanol u eluiranim molekulama RNA

Prijedlog: nakon što potvrdite da su kolone za pročišćavanje isprane puferom viRW2, izvedite centrifugiranje prazne epruvete u skladu s centrifugalnom brzinom navedenom u uputama za rad.Ako još ima preostalog etanola, može se ostaviti 5 minuta na sobnoj temperaturi nakon centrifugiranja u praznoj epruveti kako bi se uklonio preostali etanol u najvećoj mjeri.

Priručnici s uputama:

Priručnik s uputama za komplet za izolaciju virusne RNK