Escherichia Coli O157: Komplet za detekciju nukleinske kiseline H7 (metoda PCR fluorescentne sonde/liofilizacija)
Opis kompleta:
Kat.br.FP103
Koristi se za brzo otkrivanje i probir E. coli O157:H7 u uzorcima hrane, hrane za životinje, vode i okoliša.
Opisi
Koristi se zabrzo otkrivanje i probir E. coli O157:H7 u uzorcima hrane, hrane za životinje, vode i okoliša.
[Princip testiranja]
Prema principu fluorescentne PCR tehnologije, specifični primeri i Taqman sonde su dizajnirani za specifični gen Escherichie coli O157: H7, i detektirani fluorescentnim PCR instrumentom, kako bi se ostvarila detekcija Escherichie coli O157: H7 Kvalitativno otkrivanje DNA.
Sadržaj kompleta
Napomena: ROX kanalna sonda nije uključena.
| Ckomponente | Specifikacija | Quantnost |
| Međuspremnik A | Cijev | 1 |
| Međuspremnik B | Cijev | 1 |
| Pozitivna kontrola | Cijev | 1 |
| Negativna kontrola | Cijev | 1 |
Očekivana upotreba
Koristi se za brzo otkrivanje i probir E. coli O157:H7 u uzorcima hrane, hrane za životinje, vode i okoliša.
Uvjeti skladištenja i rok trajanja
Čuvajte na -20 ℃ u mraku i izbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje.
Rok valjanosti je 12mjeseci, a datum proizvodnje je naveden na vanjskom pakiranju.
Instrumenti i potrošni materijal
Fluorescentni kvantitativni PCR instrument, pištolj za pipete i odgovarajući vrhovi, vortex shaker, mini centrifuga.
Korištenje
1. Obrada uzoraka
1.1 Vrsta uzorka: Ovaj pribor je prikladan za uzorke hrane, stočne hrane, vode i druge uzorke za koje se sumnja da su kontaminirani bakterijom Escherichia coli O157:H7.Za duboko prerađene mesne proizvode, pića i druge tvari koje sadrže pigmente, potrebno ih je isprati kako bi se izbjegao utjecaj na prikupljanje fluorescentnog signala.
1.2 Obrada uzorka: pogledajte "GB 4789.10-2016 Nacionalni standard za mikrobiološko ispitivanje hrane na Escherichia coli O157: H7 test za sigurnost hrane" za pripremu uzorka, obogaćenu kulturu i izolaciju Escherichie coli O157: H7.
- Nekstrakcija ukleinske kiseline
Uzmite 20 mL otopine za obogaćivanje u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL, dodajte 200 μL mikrobnog lizata (potreban je dodatni pribor), miješajte 30 sekundi na vorteksu, kratko centrifugirajte i ostavite sa strane.
Napomene: Ekstrakcija nukleinske kiseline iz lizata trebala bi biti dovršena unutar 10 minuta i ne može se pohraniti dulje vrijeme.
3. Amplifikacija nukleinske kiseline
3.1 Uključite fluorescentni kvantitativni PCR instrument za upotrebu.
Pufer A i Pufer B iz kompleta, temeljito ih otopite i kratko centrifugirajte.Dodajte 18 μL pufera A i 2 μL pufera B u svaku PCR reakcijsku epruvetu.Zatim dodajte po 5 mL negativne kontrole, ekstrahirane nukleinske kiseline i pozitivne kontrole u PCR reakcijske epruvete, zatvorite epruvete i kratko centrifugirajte.
3.3 Prebacite PCR reakcijsku epruvetu u fluorescentni PCR stroj i upotrijebite sljedeće postupke za izvođenje eksperimenata pojačanja: odaberite 25 mL za reakcijski sustav, prikupite fluorescentne signale na 60°C za svaki ciklus i odaberite FAM za detekcijski kanal.
| Korak | Program | Broj ciklusa |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30 s (prikupiti fluorescenciju) |
Vodiči za analizu problema
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ne može se ekstrahirati RNA ili je prinos nukleinske kiseline nizak
Obično postoje mnogi čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNK u uzorku, način rada, volumen eluacije itd.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Ledena kupka ili centrifugiranje na niskoj temperaturi (4 °C) tijekom rada.
Prijedlog: rad na sobnoj temperaturi (15-25 °C), nikad ledena kupka i centrifuga na niskoj temperaturi.
2. Nepravilno skladištenje uzorka ili predugo čuvanje uzorka.
Prijedlog: Čuvajte uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovljenu upotrebu zamrzavanjem-otapanjem;pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke za ekstrakciju RNA.
3. Nedovoljna liza uzorka
Preporuka: Provjerite jesu li uzorak i radna otopina (linearni akrilamid) temeljito promiješani i inkubirani 10 minuta na sobnoj temperaturi (15-25 °C)
4. Eluens je neispravno dodan
Preporuka: Provjerite je li ddH2O bez RNaze dodan u sredinu membrane kolone za pročišćavanje
5. Neodgovarajući volumen bezvodnog etanola u puferu viRW2
Prijedlozi: Slijedite upute, dodajte točan volumen bezvodnog etanola u pufer viRW2 i dobro ih promiješajte prije upotrebe pribora.
6. Nepravilna uporaba uzorka.
Prijedlog: 200 µl uzorka na 500 µl pufera viRL.Prevelik volumen uzorka rezultirat će smanjenom brzinom ekstrakcije RNK.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Prijedlog: Volumen eluenta kolone za pročišćavanje je 30-50 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se dodati prethodno zagrijani ddH bez RNaze2O i produžite vrijeme stavljanja na sobnu temperaturu, npr. 5-10 min
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja u puferu viRW2.
Prijedlog: Ako etanol još uvijek ostaje nakon ispiranja u puferu viRW2 i centrifugiranja u praznoj epruveti tijekom 2 minute, kolona za pročišćavanje može se ostaviti na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja u praznoj epruveti kako bi se u potpunosti uklonio preostali etanol.
Razgradnja pročišćenih molekula RNA
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su skladištenje uzorka, kontaminacija RNazom i rad.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Prikupljeni uzorci nisu spremljeni na vrijeme.
Prijedlog: Ako se uzorak ne upotrijebi na vrijeme nakon uzimanja, odmah ga pohranite na -80 ℃ ili u tekućem dušiku.Za ekstrakciju RNA molekula pokušajte koristiti svježe prikupljene uzorke kad god je to moguće.
2. Prikupljeni uzorci su se opetovano zamrzavali i odmrzavali.
Prijedlog: Izbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje (ne više od jednom) tijekom prikupljanja i pohranjivanja uzorka, inače će se prinos nukleinske kiseline smanjiti.
3. RNaza je uvedena u operacijsku salu ili nisu nošene jednokratne rukavice, maske itd.
Prijedlog: Pokus ekstrakcije RNA molekula najbolje je izvesti u zasebnoj RNA operacijskoj sobi, a pokusni stol očistiti prije pokusa.Nosite jednokratne rukavice i maske tijekom eksperimenta kako biste izbjegli degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNaze.
4. Reagens je kontaminiran RNazom tijekom upotrebe.
Prijedlog: Zamijenite novim kompletom za izolaciju virusne RNK za povezane pokuse.
5. Kontaminacija centrifugalnih epruveta, vrhova pipeta itd. Rnazom. Prijedlog: Provjerite jesu li epruvete centrifuge, vrhovi pipeta i pipete bez RNaze.
Pročišćene molekule RNA utjecale su na nizvodne eksperimente
Molekule RNA pročišćene kolonom za pročišćavanje utjecat će na nizvodne eksperimente ako ima previše iona soli ili proteina, kao što su: reverzna transkripcija, Northern Blot, itd.
1. Postoje preostali ioni soli u eluiranim molekulama RNA.
Preporuka: Provjerite je li točan volumen bezvodnog etanola dodan u pufer viRW2 i dvaput operite kolonu za pročišćavanje u skladu s ispravnom brzinom centrifugiranja u uputama za rad；Ako još ima preostalih iona soli, možete dodati pufer viRW2 u kolonu za pročišćavanje i ostaviti je na sobnoj temperaturi 5 minuta.Zatim izvedite centrifugiranje kako biste u što većoj mjeri uklonili kontaminaciju ionima soli
2. Postoji preostali etanol u eluiranim molekulama RNA
Prijedlog: nakon što potvrdite da su kolone za pročišćavanje isprane puferom viRW2, izvedite centrifugiranje prazne epruvete u skladu s centrifugalnom brzinom navedenom u uputama za rad.Ako još ima preostalog etanola, može se ostaviti 5 minuta na sobnoj temperaturi nakon centrifugiranja u praznoj epruveti kako bi se uklonio preostali etanol u najvećoj mjeri.
Priručnici s uputama:
Priručnik s uputama za komplet za izolaciju virusne RNK
