Vodič za analizu problema

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Nizak prinos ili bez DNK

Obično postoje mnogi čimbenici koji utječu na prinos genomske DNA, uključujući izvor uzorka, starost uzorka, uvjete skladištenja uzorka i rad.

Genomska DNK nije se mogla dobiti tijekom ekstrakcije

1. Uzorci tkiva su nepropisno pohranjeni ili su pohranjeni predugo, što je rezultiralo degradacijom genomske DNA.

Preporuka: Pohranite uzorke tkiva u tekućem dušiku ili -20°C;pokušati koristiti novo prikupljene uzorke za ekstrakciju genomske DNA.

2. Premala količina uzorka može uzrokovati da se odgovarajuća genomska DNA ne ekstrahira.

Prijedlog: Za uzorke tkiva koji su bili pohranjeni dulje vrijeme ili imaju ozbiljnu degradaciju genomske DNK, količina uzoraka tkiva može se na odgovarajući način povećati kako bi se izdvojila značajna količina genomske DNK.Količina uzorka može se odrediti prema potrebama DNA, ali svježi uzorak ne smije biti veći od 100 mg, a suhi uzorak ne smije biti veći od 30 mg.

3. Uzorak se ne melje s tekućim dušikom ili se ne stavlja predugo nakon tekućeg dušika.

Prijedlog: Tijekom ekstrakcije DNK, uzorak treba potpuno samljeti tekućim dušikom kako bi se razbila stanična stijenka;nakon mljevenja, prenesite uzorak praha u PL1 prethodno zagrijan na 65°C što je prije moguće (kad se mljeveni prah otopi, genomska DNK počet će se brzo razgrađivati) .

4. Nepravilno skladištenje Foregene Protease rezultira smanjenom ili inaktiviranom aktivnošću.

Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja Foregene Protease ili je zamijenite novom Foregene Protease za enzimsku hidrolizu.

5. Komplet je nepropisno pohranjen ili pohranjen predugo, što uzrokuje kvar nekih komponenti u kompletu.

Preporuka: Kupite novi komplet za ekstrakciju genomske DNK biljke za povezane operacije.

6. Nepravilna uporaba kompleta.

Prijedlog: Kupite set za izolaciju biljne DNA namijenjen uzorcima za ekstrakciju i pročišćavanje biljne genomske DNA.

7. Puffer WB bez dodavanja abezvodni etanol.

Preporuka: Provjerite jeste li dodali točan volumen apsolutnog etanola u pufer WB.

8. Eluens nije pravilno nakapan na membranu od silicijevog dioksida.

Prijedlog: Dodajte prethodno zagrijani eluent na 65℃kap po kap do sredine membrane silikagela i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali učinkovitost eluiranja.

Ekstrakcija za dobivanje genomske DNA niskog prinosa

1. Uzorak je nepropisno pohranjen ili pohranjen predugo, što je rezultiralo degradacijom genomske DNA.

Preporuka: Čuvajte uzorke tkiva na -20℃;pokušati upotrijebiti novosakupljene uzorke tkiva za ekstrakciju genomske DNA.

2. Ako je količina uzoraka tkiva premala, ekstrahirana genomska DNA bit će manja.

Prijedlozi: neki uzorci biljaka bogati su vodom, poput vodenih biljaka poput algi itd., doza se može odgovarajuće povećati ili se voda može malo dehidrirati prije operacije.

3. Uzorci nisu bili temeljito samljeveni tekućim dušikom ili su ostavljeni na sobnoj temperaturi predugo nakon mljevenja.

Prijedlog: mljevenje tekućim dušikom mora biti dovoljno, a stanična stijenka uzorka treba biti slomljena što je više moguće;odmah nakon mljevenja, uzorak praha treba prenijeti u 65℃prethodno zagrijani pufer PL1 za sljedeći korak.

4. Ne koristite odgovarajući pribor.

Preporuka: Koristite namjenski set za izolaciju biljne DNA za izdvajanje i pročišćavanje genomske DNK biljke.

5. Nepravilno skladištenje Foregene Protease rezultira smanjenom ili inaktiviranom aktivnošću.

Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja Foregene Protease ili je zamijenite novom Foregene Protease za enzimsku hidrolizu.

6. Problem eluenta

Preporuka: Molimo koristite pufer EB za ispiranje;ako koristite ddH₂O ili drugim eluensima, provjerite je li pH eluensa između 7,0-8,5.

7. Eluens nije ispravno ukapan

Prijedlog: Dodajte kapljicu za eluiranje u sredinu silikatne membrane i ostavite je na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali učinkovitost eluiranja.

8. Volumen eluenta je premali

Prijedlog: Koristite eluens za eluiranje genomske DNA prema uputama, barem ne manje od 100μl.

Ekstrahirana genomska DNA niske čistoće

Niska čistoća genomske DNA dovest će do neuspjeha ili lošeg učinka nizvodnih eksperimenata, kao što su: enzim se ne može rezati, a ciljni fragment gena ne može se dobiti PCR-om.

1. Kontaminacija raznim proteinima, kontaminacija RNA.

Analiza: pufer PW nije korišten za ispiranje kolone;Pufer PW nije korišten za ispiranje kolone pri ispravnoj brzini centrifugiranja.

Prijedlog: pokušajte osigurati da u supernatantu nema taloga kada supernatant prolazi kroz kolonu;obavezno isperite kolonu za pročišćavanje puferom PW prema uputama, a ovaj se korak ne smije izostaviti.

2. Zagađenje ionima nečistoće.

Analiza: kolona za ispiranje pufera WB izostavljena je ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.

Preporuka: Obavezno isperite dva puta s Buffer WB prema uputama kako biste uklonili zaostale ione što je više moguće.

3. Kontaminacija RNazom.

Analiza: Egzogena RNaza se dodaje puferu;neispravna operacija pranja u puferu PW rezultirat će zaostalom RNazom i utjecati na nizvodne eksperimentalne operacije RNA, kao što je in vitro transkripcija.

Prijedlog: Kompleti za ekstrakciju nukleinske kiseline iz serije Foregene mogu ukloniti RNK bez dodatne RNaze, a svi reagensi u Kompletu za izolaciju DNA biljke ne trebaju RNazu;obavezno isperite kolonu za pročišćavanje puferom PW prema uputama, a ovaj se korak ne smije izostaviti.

4. Ostaci etanola.

Analiza: Nakon ispiranja kolone za pročišćavanje puferom WB nije provedeno centrifugiranje prazne epruvete.

Preporuka: Slijedite upute za ispravno centrifugiranje praznih epruveta.

Upute za uporabu:

Priručnik s uputama za komplet za izolaciju biljne DNA