Uvod:

Molekule RNA mogu intenzivno komunicirati s drugim biološkim molekulama, poput proteina, DNA i RNA, te tako postojati u stanicama i organizmima u obliku makromolekularnih kompleksa.Među njima su RNA-proteinski kompleksi postojanje i funkcija RNA Jedan od važnih oblika.RNA pull-down je klasična metoda za probir i identifikaciju RNA molekula, posebno interagirajućih proteina lncRNA molekula, a prepoznata je od strane većine istraživača i međunarodnih autoritativnih akademskih časopisa.Danas će FORREGENE podijeliti s vama eksperimentalni princip i tehnički proces RNA pull-down, možda ga možete koristiti

1. Eksperimentalni princip RNA pull down tehnologije:

In vitro transkripcija i sinteza biotinom obilježene ciljne lncRNA ili lncRNA fragmenata (uključujući fragmente RNA koji se koriste kao pozitivne i negativne kontrole) i inkubirati sa staničnim ekstraktima;koristite magnetske kuglice usidrene na avidinu za prikupljanje kompleksa RNA-protein ili RNA-RNA. Nakon temeljitog ispiranja, kompleks se eluira.Ako otkrijete ciljnu molekulu proteina koja je u interakciji s lncRNA, izvedite elektroforezu proteina na proizvodu RNA-pull down, detektirajte ciljni protein bojenjem srebrom i izrežite gel za masenu spektrometriju;također izravno provesti Western blot verifikaciju na padajućem proizvodu;ako se otkrije Za RNA ciljne molekule koje stupaju u interakciju s lncRNA, RNA-pull down proizvodi podvrgavaju se ekstrakciji RNA i provodi se specifična qRT-PCR detekcija.

2. RNA pull down tehnološki eksperimentalni proces:

3. Tehnička služba za RNA pull down FOREGENE:

Kultura stanica

Priprema ekstrakta staničnih ukupnih/nuklearnih/plazma proteina

RNA pull down eksperiment

SDS-PAGE elektroforeza, bojenje srebrom

Masena spektrometrija i WB eksperimenti

Eksperimentalni izvještaj

4. Eksperimentalni slučaj

Sljedeća slika prikazuje rezultate FJ Bio-Bio RNA pull down i detekcije SDS-PAGE elektroforeze, u kojoj crvena strelica označava pojas razlike:

Istraživačka grupa profesora Song Xua sa Sveučilišta Sichuan akumulirala je 15 godina dugoročne akumulacije u polju istraživanja lncRNA.Foregene Bio i istraživačka grupa profesora Song Xua surađivali su na pokretanju RNA pull down tehnologije lncRNA, koja će vam dati zadovoljavajuće rezultate za vaš eksperiment.