voditi

Duga nekodirajuća RNA, lncRNA je nekodirajuća RNA duljine veće od 200 nukleotida, općenito između 200-100 000 nt.lncRNA regulira ekspresiju gena na epigenetskoj, transkripcijskoj i posttranskripcijskoj razini i sudjeluje u utišavanju kromosoma X, utiskivanju genoma i modifikaciji kromatina, aktivaciji transkripcije, interferenciji transkripcije, nuklearnom transportu, regulaciji staničnog ciklusa, regulaciji stanične diferencijacije i učincima kompenzacije doze (učinak kompenzacije doze) i mnogim drugim važnim regulacijskim procesima usko su povezani s pojavom, razvojem i prevencijom ljudskog bolesti, a trenutno su jedna od vrućih točaka u području biomedicine.

01  Vrste i karakteristike LncRNA

lncRNA je podijeljena u mnoge tipove prema različitim izvorima njezinog formiranja, kao što je prikazano na gornjoj slici.Ima sljedeće karakteristike:

1. lncRNA su obično duže, s dinamičkom ekspresijom i različitim metodama spajanja tijekom diferencijacije
2. U usporedbi s kodirajućim genima, lncRNA obično ima nižu razinu ekspresije
3. Većina lncRNA ima očitu vremensku i prostornu specifičnost ekspresije u procesu diferencijacije i razvoja tkiva
4. Postoje karakteristični izrazi kod tumora i drugih bolesti
5. Subcelularna mjesta lncRNA su raznolika
6. Slijed je niske očuvanosti, ali funkcija ima određeni stupanj očuvanosti, itd.

02 Često postavljana pitanja o reverznoj transkripciji LncRNA

Zbog niskog sadržaja lncRNA u stanicama, duge duljine i strukture na visokoj razini, takva RNA često ima složene strukture kao što su stabljične petlje ili ukosnice, a RT-qPCR je sklon problemima neuspješne obrnute transkripcije ili niske učinkovitosti.

03 Rješenje za reverznu transkripciju LncRNA

U središnjem pravilu, proces RNK virusa koji koriste vlastitu reverznu transkriptazu za sintetiziranje DNK koristeći RNK kao predložak naziva se reverzna transkripcija.Proces korištenja reverzne transkriptaze RNA virusa za sintezu cDNA predloška in vitro naziva se reverzna transkripcija.Glavni elementi uključeni u sustav reverzne transkripcije: RNA predložak, reverzna transkriptaza, početnice i druge komponente.

1. predložak RNA

Utjecaj RNA predloška na reverznu transkripciju ogleda se u njegovoj strukturi, čistoći i cjelovitosti.Što su veća čistoća i integritet ekstrahirane RNA, to je veća učinkovitost reverzne transkripcije i točniji naknadni kvantitativni rezultati.RNA pročišćena uobičajeno korištenim reagensima za ekstrakciju RNA često sadrži ostatke alkohola i gvanidinskih soli, koji imaju snažan inhibitorni učinak na većinu reverzne transkriptaze.

2.Reverzna transkriptaza

Reverzna transkriptaza ima ključni utjecaj u cijelom sustavu reverzne transkripcije.Prikladna temperatura za reverznu transkriptazu koja se koristi u većini laboratorija općenito je 42°C.Zapravo, otvaranje strukture visoke razine RNA zahtijeva višu temperaturu, a zahtjevi za reverznom transkriptazom su veći.

3.Primer

Primeri reverzne transkripcije uključuju početnice specifične za gen, nasumične početnice i Oligo dT početnice.Većina lncRNA ne sadrži poliA repove i važno je pravilno spojiti nasumične početnice s Oligo dT.

4.Ostale komponente

S obzirom na činjenicu da se RNA posebno lako razgrađuje, uvođenje komponenata u sustav reverzne transkripcije može se minimizirati, što može učinkovito spriječiti ulazak RNaze i osigurati nesmetan napredak reverzne transkripcije.

Foregendobiva iz RNA predloška, ​​obrnutom transkripcijom u qPCR

Sveobuhvatno popratite svoju detekciju lncRNA

Ukupna životinjska RNA IsolationKomplet (sa kolonom za uklanjanje gDNA)

Cell Total RNA IsolationKomplet (sa kolonom za uklanjanje gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (s gDNase) (Super premiks za sintezu prvog lanca cDNA iz lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aprednosti ofekstrakcija RNA:

Komplet koristi tehnologiju ekstrakcije RNK treće generacije, nema potrebe za korištenjem DNaze.

11 minuta iz kultiviranih stanica na pločama s 96, 24, 12 i 6 jažica, visokoučinkovita ekstrakcija ukupne stanične RNA visoke čistoće bez gDNA.

Prednosti lncRNA obrnute transkripcije:

Sustav obrnute transkripcije posebno razvijen za LncRNA za brzo uklanjanje kontaminacije genomske DNA.

Sustav obrnute transkripcije ima visoku toplinsku stabilnost i još uvijek ima dobre performanse obrnute transkripcije na 50°C.

Predlošci s visokim GC sadržajem i složenom sekundarnom strukturom mogu se preokrenuti s visokom učinkovitošću.

Prednostiof qPCR:

Hot start Foregene Taq polimeraza ima veću učinkovitost pojačanja, veću osjetljivost pojačanja i veću specifičnost pojačanja

Optimizirani Real PCR Easy Mix čini SYBR Green I većom osjetljivošću detekcije, a njegov intenzitet fluorescencije je 3-5 puta veći od sličnih proizvoda, što može zadovoljiti potrebe različitih vrsta kvantitativnih eksperimenata fluorescencije.