Hot-start Taq enzim naširoko se koristi.U usporedbi s običnom DNA polimerazom, Taq enzim s vrućim startom može učinkovito izbjeći neke nespecifične amplifikacije i stvaranje početnih dimera te može učinkovito poboljšati stopu uspješnosti amplifikacije ciljnog gena.Osobito u području genetskog testiranja, Taq enzim s vrućim startom identificiran je kao obvezni standard u industriji, a obična DNA polimeraza ne bi se trebala koristiti.Kao što se može vidjeti iz gore navedenog, Taq enzimi s vrućim startom naširoko se koriste.Trenutačno na domaćem tržištu postoji mnogo marki Taq enzima za vrući početak, ali nema mnogo visokokvalitetnih Taq enzima za vrući početak.Suočeni s toliko mnogo hitrih Taq enzimskih proizvoda, kako odabrati?

1. Odaberite Taq enzim s vrućim startom s visokom učinkovitošću pojačanja

Učinkovitost PCR pojačanja usko je povezana s izvedbom enzima Taq.Nakon što se optimizira dobar Taq enzimski reakcijski sustav, učinkovitost pojačanja je iznad 95%, a raspon amplifikacije početne količine šablona je širok.Zadovoljavajuća amplifikacija može se postići kada je sadržaj ciljnog gena nizak, a nije lako otrovati se kada je količina predloška velika, a eksponencijalno razdoblje amplifikacije dugo.Za Taq enzim s lošim performansama, čak i ako je reakcijski sustav optimiziran mnogo puta, učinkovitost pojačanja je još uvijek manja od 90%, "S" oblik krivulje pojačanja nije očit, nagib je mali, a krivulja je ravna.Kada je količina predloška mala, ne može se pojačati, a kada je količina predloška velika, učinak pojačanja nije idealan.Stoga je odabir DNA polimeraza s visokom učinkovitošću amplifikacije ključan za uspjeh PCR-a i qPCR-a.

2. Odaberite Taq enzim za vrući početak s jakom snagom enzima

Enzimska snaga enzima Taq povezana je s učinkovitošću pojačanja.Općenito, što je jača enzimska snaga Taq enzima za vrući početak, to je duže eksponencijalno razdoblje rasta PCR amplifikacije, to je tipičnija krivulja 'u obliku slova S', to je veća vrijednost signala fluorescencije i to je prikladnije za multipleksnu PCR detekciju.Brand DNA polimeraze sa slabom enzimatskom snagom općenito mogu podržavati samo 2-plex reakcije.Prilikom izvođenja 3-plex reakcija, krivulja pojačanja je niska, vrijednost signala fluorescencije je niska i ne postoji tipična krivulja pojačanja, pa je rezultate teško procijeniti.

3. Odaberite Taq enzim za vrući početak s visokom osjetljivošću

Općenito govoreći, DNA polimeraza ima visoku učinkovitost pojačanja i visoku osjetljivost, ali postoje i nedosljednosti.Ako je brojnost ciljnog gena u uzorku koji treba umnožiti niska, preporučuje se testiranje osjetljivosti umnožavanja enzima Taq.Najčešća metoda detekcije je provođenje 10-strukog ili 5-strukog gradijentnog razrjeđenja fragmenta plazmida ciljnog gena, provođenje PCR detekcije pri nižem razrjeđenju i odabir Taq enzima s vrućim startom s većom osjetljivošću detekcije.

Iz navedenog se može vidjeti da istraživači trebaju birati prema vlastitim eksperimentalnim zahtjevima i uvjetima financiranja.Najbolje je napraviti eksperiment pojačanja s gradijentnim razrjeđenjem kako bi se otkrila učinkovitost pojačanja i osjetljivost Taq enzima za vrući početak.

Primjer Foregene's Taq DNA polimeraza:

Foreasy HS Taq DNA polimeraza

Opis

Foreasy HS Taq DNA polimeraza je DNA polimeraza eksprimirana u Escherichia coli inženjerskim bakterijama tehnologijom rekombinacije gena.Enzim je kombiniran s jedinstvenim puferom za reakciju, što proizvod čini vrlo otpornim i kompatibilnim, te može izravno koristiti lizat uzorka (sustav Foregene Lysis) kao predložak za reakcije detekcije.

Primjena

Kvalitativna PCR i kvantitativna PCR detekcija pročišćenih i nepročišćenih šablona.

Kontrola kvalitete

1. Nije otkrivena aktivnost egzogene nukleaze

2.PCR metoda za otkrivanje rezidualne genomske DNA bez domaćina

3. Može učinkovito pojačati jednostruke gene u ljudskom genomu

4. Čuvati na sobnoj temperaturi tjedan dana, bez očitih promjena aktivnosti

Pojedinosti o proizvodu: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/