Izgradnja SOP sustava

Uspostavite SOP za PCR eksperiment kako biste standardizirali ponašanje osoblja za eksperiment.

Eksperimentatori se strogo pridržavaju operativnih procedura, te minimiziraju zagađenje PCR-om koje može biti uzrokovano ljudskim faktorom ili sprječavaju pojavu onečišćenja tijekom rada.Osim toga, eksperimentator treba imati odgovarajuća stručna znanja i vještine, uključujući vještinu u rukovanju pripadajućom opremom, pojašnjavanje cjelokupnog procesa rada, ovladavanje metodama obrade kontaminacije i metodama laboratorijske kontrole kvalitete, te sposobnost ispravnog tumačenja rezultata ispitivanja.

Izgradnja standardnog PCR laboratorija

Laboratorij za PCR načelno je podijeljen u četiri područja, naime područje pripreme reagensa, područje obrade uzorka, područje umnožavanja i područje analize proizvoda umnožavanja.Prva dva područja su područja prije pojačanja, a zadnja dva područja su područja nakon pojačanja.Zona pred pojačanja i zona naknadnog pojačanja trebaju biti strogo odvojene.Eksperimentalni materijali, reagensi, papir za snimanje, olovke, materijali za čišćenje itd. mogu teći samo iz područja pred pojačanja u područje nakon pojačanja, odnosno iz područja pripreme reagensa, područja obrade uzorka, područja pojačanja i područja analize proizvoda pojačanja, i ne smiju teći u obrnutom smjeru.Protok zraka u laboratoriju također bi trebao teći iz područja pred pojačanja u područje nakon pojačanja, a ne u obrnutom smjeru.

Smanjite eksperimentalne korake

Ako laboratorij provodi samo PCR detekciju i identifikaciju, preporuča se koristiti fluorescentni kvantitativni PCR umjesto konvencionalnog PCR-a.

Rezultati fluorescentne kvantitativne PCR detekcije mogu se prikupiti i analizirati fluorescentnim signalima, tako da nema potrebe za otvaranjem poklopca za elektroforezu nakon reakcije, čime se izbjegava kontaminacija PCR produkata uzrokovana istjecanjem reakcijskih produkata u obliku aerosola.Ako povećate broj otvora poklopca tijekom koraka punjenja gel elektroforeze, vjerojatno će doći do kontaminacije aerosolom.Preporuča se promicanje primjene kvantitativnog PCR-a i postupna zamjena kvalitativnog PCR-a.

Usvojiti UNG sustav protiv onečišćenja

Za PCR reakciju koristi se UNG anti-PCR sustav kontaminacije proizvoda.

Sustav koristi dUTP umjesto dTTP.Nakon PCR reakcije, svi PCR produkti (fragmenti DNA) ugrađeni su s dUTP;u sljedećoj rundi PCR reakcije, UNG enzim dodan u sustav inkubira se na 37°C 5 minuta prije PCR-a, koji može biti specifičan Degradirajte sve fragmente DNA koji sadrže dUTP, a zatim izvedite PCR reakciju.Ovo može potpuno ukloniti kontaminaciju aerosolom uzrokovanu PCR proizvodima.Učinak je prikazan na slici ispod:

Napomena: Za izravnu PCR seriju, možete odabrati seriju proizvoda sustava protiv onečišćenja proizvoda PCR tvrtke FJ Biotech

Predložiti

Za laboratorije koji provode opsežno testiranje genotipizacije, snažno se preporučuje korištenje UNG anti-PCR sustava kontaminacije proizvoda za testiranje reagensa uz izgradnju razumnih laboratorija.

Podsjetnik: korištenje ovog sustava ne može ukloniti već uzrokovanu kontaminaciju PCR proizvodom.Stoga se UNG sustav treba koristiti na početku relevantnog testa, a UNG sustav uvijek treba koristiti za PCR amplificiranje, kako bi se spriječila kontaminacija PCR proizvoda.Lažno pozitivno.

Preporuča se koristiti sustav Direct PCR-UNG tvrtke Forge Biotech pri provođenju testiranja velikih razmjera, kao što je: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Ova serija kitova iz Foregene ne samo da može izvesti PCR detekciju brzo i u velikim razmjerima, već i učinkovito spriječiti i kontrolirati kontaminaciju PCR proizvoda.