Uspostavite SOP za PCR eksperiment kako biste standardizirali ponašanje osoblja za eksperiment.
Eksperimentator se strogo pridržava operativnih procedura, te minimalizira onečišćenje PCR-om koje može biti uzrokovano ljudskim faktorom ili sprječava pojavu onečišćenja.Osim toga, eksperimentator treba imati odgovarajuća stručna znanja i vještine, uključujući vještinu u rukovanju pripadajućom opremom, pojašnjavanje cjelokupnog procesa rada, ovladavanje metodama obrade kontaminacije i metodama laboratorijske kontrole kvalitete, te sposobnost ispravnog tumačenja rezultata ispitivanja.
Uspostaviti standardni PCR laboratorij.
Laboratorij za PCR načelno je podijeljen na četiri područja, i to područje pripreme reagensa, područje obrade uzorka, područje umnožavanja i područje analize proizvoda umnožavanja.Prva dva područja su područja prije pojačanja, a zadnja dva područja su područja nakon pojačanja.Zona pred pojačanja i zona naknadnog pojačanja trebaju biti strogo odvojene.Eksperimentalni materijali, reagensi, papir za snimanje, olovke, materijali za čišćenje itd. mogu teći samo iz područja pred pojačanja u područje nakon pojačanja, to jest iz područja pripreme reagensa → područja obrade uzorka → područja pojačanja → područja analize proizvoda pojačanja, i ne smiju teći unatrag.Protok zraka u laboratoriju također bi trebao teći iz područja pred pojačanja u područje nakon pojačanja, a ne teći unatrag.Idealan dizajn PCR laboratorija prikazan je u nastavku:
Slika A: Idealan način PCR laboratorijskog postavljanja s negativnim tlakom u međuprostoru
Slika B: Idealan način PCR laboratorijskog postavljanja s pozitivnim tlakom u međuprostoru
Dijagrami PCR laboratorijskih postavki dani na slici A i slici B trebali bi biti idealniji način postavljanja, a laboratorij s uvjetima može se pozvati na ovaj način za dizajn.Za obične laboratorije preporučuje se da područje PCR amplifikacije i područje analize proizvoda mogu biti odvojeni, a otvor poklopca treba smanjiti što je više moguće u području pripreme uzorka i području PCR amplifikacije.Upamtite: Strogo je zabranjeno unositi proizvode i eksperimentalne zalihe u prostor za analizu proizvoda u prostor za pripremu uzoraka i prostor za PCR umnožavanje.
Ako laboratorij provodi samo PCR detekciju i identifikaciju, preporuča se koristiti fluorescentni kvantitativni PCR umjesto konvencionalnog PCR-a.
Rezultati kvantitativne PCR detekcije fluorescencije mogu se prikupiti i analizirati pomoću fluorescentnih signala, tako da nema potrebe za otvaranjem poklopca za elektroforezu nakon reakcije, čime se izbjegava kontaminacija PCR produkta uzrokovana istjecanjem produkata reakcije u obliku aerosola.Ako povećate broj otvora poklopca tijekom koraka punjenja gel elektroforeze, vjerojatno će doći do kontaminacije aerosolom.Preporuča se promicanje primjene kvantitativnog PCR-a i postupna zamjena kvalitativnog PCR-a.
Za PCR reakciju koristi se UNG anti-PCR sustav kontaminacije proizvoda.
Sustav koristi dUTP umjesto dTTP.Nakon PCR reakcije, svi PCR produkti (fragmenti DNA) ugrađeni su s dUTP;u sljedećoj rundi PCR reakcije, UNG enzim dodan u sustav inkubira se na 37°C 5 minuta prije PCR-a, koji može specifično razgraditi sve fragmente DNA koji sadrže dUTP, a zatim izvesti PCR reakciju.Ovo može potpuno ukloniti kontaminaciju aerosolom uzrokovanu PCR proizvodima.Učinak je prikazan na slici ispod:
Napomena: Za izravnu PCR seriju možete odabrati seriju proizvoda Foregene sustava protiv kontaminacije PCR proizvodimaPredložiti
Za laboratorije koji provode opsežno testiranje genotipizacije, snažno se preporučuje korištenje UNG anti-PCR sustava kontaminacije proizvoda za testiranje reagensa uz izgradnju razumnih laboratorija.
Podsjetnik: korištenje ovog sustava ne može ukloniti već uzrokovanu kontaminaciju PCR proizvodom.Stoga se UNG sustav treba koristiti na početku relevantnog testa, a UNG sustav treba koristiti za PCR amplificiranje, kako bi se spriječila kontaminacija PCR proizvoda Lažno pozitivni.
Preporuča se korištenje Foregene sustava Direct PCR-UNG pri provođenju opsežnih testiranja, kao što su:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ova serija kompleta iz Foregenene samo da može izvesti PCR detekciju brzo i u velikoj mjeri, već i učinkovito spriječiti i kontrolirati kontaminaciju PCR proizvoda.
Vrijeme objave: 19. ožujka 2021
