Savjeti za poboljšanje oporavka ljepila

1. Povećajte količinu uzorka tijekom elektroforeze.

2. Koristite svježe pripremljeni pufer za elektroforezu.

3. Prilikom rezanja ljepila, pokušajte rezati samo ljepilo s trakama kako biste smanjili volumen rezanja ljepila: ne trebate ljepilo s nekoliko namjenskih fragmenata, inače će utjecati na stopu oporavka.

4. Nakon što otopite dva ili više komada ljepila, upotrijebite epruvetu bez obzira koliki je volumen i prenesite je u istu kolonu.

5. Otopina dodana u sol može biti malo veća, što je pogodnije za vezanje DNA na membranu, ali općenito ne prelazi 750 ul.

6. Ključ za dobivanje gela je vezanje DNK na kolonu kroz koncentraciju soli, kiselost (naboj) i hidrofobnost otopine u koloni.Stoga, ako je pH pufera za elektroforezu previsok, 10 ul (pH 5,0, 3 mol/L NaAC) može se dodati u sol;kako bi se bolje presrele molekule DNA na membrani, može se dodati 30% izopropanol koji će se zagrijati u tekućinu nakon otapanja ljepila.

7. Prije dodavanja eluensa, ostavite kolonu na sobnoj temperaturi nekoliko minuta (oko 10 minuta) da potpuno ispari etanol.

8. Na kraju, dodajte manje eluenta kako biste smanjili volumen povrata.Općenito, za eluiranje se koristi 30-50 μl eluensa (ne premalo, inače neće moći smočiti membranu, što nije pogodno za eluiranje);elucijske kapljice su u središtu membrane, kako bi se u potpunosti eluirala DNA vezana na membranu.

9. Nakon dodavanja eluensa, može se eluirati u vodenoj kupelji od 55 stupnjeva 5 minuta ili staviti u vodenu kupelj od 50 stupnjeva dulje od 10 minuta, ili zatvoriti parafilmom na 4 stupnja preko noći, a zatim centrifugirati za oporavak sljedeći dan, učinak je dobar.

10. Dodajte centrifugirani eluat natrag u adsorpcijsku kolonu i ponovno centrifugirajte.

Detaljne metode i postupci za izdvajanje PCR proizvoda

1. Recikliranje obične gume

Ako želite obnoviti ljepilo, najbolje je koristiti kit, koji je praktičan i ima nešto veću stopu obnavljanja.Ako ga stvarno trebate ručno oporaviti, možete dodati 3 puta više volumena TE nakon rezanja ljepila.Nakon taljenja u vodenoj kupelji, fenol, fenol/kloroform se čisto ekstrahiraju, a etanol se istaloži.To je to.

2. Oporavak DNA iz gelova niske točke tališta

Pročišćavanje fragmenata DNA Dodajte TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmol/l EDTA) jednak volumenu gela i stavite u vodenu kupelj na 65°C na 5 minuta da se gel potpuno otopi.

Nakon što je dovedena do sobne temperature, dodana je jednaka količina fenola (zasićenog TE, TE je zatvoren u gornjem sloju, a donji sloj fenola uklonjen) i smjesa je lagano promiješana (nije potrebno miješanje) i centrifugirana na 12 000 okretaja u minuti 3 minute.Ponoviti 1-2 puta.

Uzmite supernatant, dodajte 0,1 volumena 3 mol/L natrijeva acetata (pH 5,2) i 2,5 puta veći volumen apsolutnog etanola kako biste izvršili taloženje etanolom.Otopite pročišćenu DNA s odgovarajućom količinom TE, izmjerite sadržaj i pripremite za upotrebu (može se koristiti za analizu strukture ciljnog gena, pripremu sonde itd.).

3. PCR oporavak s dobrom specifičnošću pojačanja

Ako je specifičnost PCR amplifikacije dobra, radi se samo o jednostavnom pročišćavanju i obnavljanju PCR produkta.Možete dodati 50 ug/ml proteinaze K u PCR proizvod, 37 stupnjeva tijekom 1 sata, ekstrahirati jednom s fenolom/kloroformom, ekstrahirati jednom s kloroformom i dodati 0,1 volumena supernatanta.Natrijev acetat je oporavljen taloženjem s 2,5 volumena apsolutnog etanola.

Povezani proizvodi:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/