• facebook
  • linkedin
  • youtube

PCR metode i kontaminacija aerosolom nukleinske kiseline u laboratorijima za testiranje nukleinske kiseline dvije su strane novčića.Možemo samo birati hoćemo li ga imati ili ne, ali ne možemo birati hoćemo li ga ili ćemo potrošiti.

onečišćenje1

1. Probir sredstva za uklanjanje DNA

Da bi se postiglo prostorno uklanjanje kontaminacije aerosolom nukleinske kiseline, prvo je potrebno izdvojiti sredstva za uklanjanje DNK koja mogu ukloniti nukleinske kiseline u tekućem stanju.Jer nema mnogo sredstava za uklanjanje DNK koji stvarno djeluju.Za eksperimentalnu metodu, pogledajte: DNA remover ne može biti "tajni kutak" laboratorija!

U ovom eksperimentu, 100 kopija/μL (CT približno 31) ASFV plazmida i sredstva za uklanjanje DNK kvantificiranog digitalnom PCR-om pomiješano je u jednakim volumenima, a zatim je reagiralo na sobnoj temperaturi 10 min, 20 min odnosno 30 min.Nakon ekstrakcije nukleinske kiseline, provedena je qPCR amplifikacija.Uspoređena je pozitivna kontrola pomiješana s plazmidom i vodom.Budući da eksperiment nije dovršen u isto vrijeme, može doći do određenog odstupanja između rezultata, ali to ne utječe na zaključak eksperimenta.Do sada sam procijenio 10 komercijalnih proizvoda za uklanjanje DNK.Samo proizvodi br. 1, br. 6 i br. 8 mogu učinkovito razgraditi plazmidnu DNA u tekućem stanju.Ostali proizvodi nemaju gotovo nikakav učinak.

Tablica 1. Učinak uklanjanja nukleinske kiseline komercijalno dostupnog sredstva za uklanjanje DNK

onečišćenje2

2. Eksperiment s učinkom uklanjanja DNA često korištenih dezinficijensa

1. Pregled često korištenih dezinficijensa

Postoje mnoge vrste dezinficijensa koji se obično koriste u laboratorijima: aldehidi, fenoli, alkoholi, kvaterne amonijeve soli, peroksidi, pripravci klora te kiseline i baze.Dezinfekcijsko djelovanje ovih dezinficijensa na mikroorganizme u potpunosti je potvrđeno eksperimentima, ali nema dovoljno eksperimentalnih podataka o razgradnom učinku nukleinskih kiselina.Laboratoriji za testiranje nukleinskih kiselina trebaju dezinficijens koji ne samo da ima dobar dezinfekcijski učinak na mikroorganizme, već također može degradirati DNA.Rezultati ispitivanja pokazuju da samo dva klorna pripravka 84 dezinficijensa i trikloroizocijanurne kiseline i 1 M solne kiseline zadovoljavaju uvjete.Budući da je 1 M klorovodična kiselina vrlo korozivna, preporuča se da se pripravci klora koriste kao otpad u laboratorijima za ispitivanje nukleinske kiseline.Međutim, pripravci klora korozivno djeluju na metale i ne mogu se koristiti za dezinfekciju instrumenata i opreme.

Tablica 2. Učinci uklanjanja DNK različitih vrsta dezinficijensa

onečišćenje3

2. Minimalna učinkovita koncentracija pripravaka klora

Sredstva za dezinfekciju na bazi klora imaju snažan učinak razgradnje DNK, ali zbog svoje metalne korozivnosti i iritacije, mogu se koristiti za čišćenje poda, nemetalnih radnih ploča, vrhova za namakanje, centrifugalnih epruveta i drugih predmeta za ispitivanje.

Prema "Novim tehničkim smjernicama za dezinfekciju epidemije koronarne upale pluća": Zagađivači (krv pacijenata, izlučevine i povraćani sadržaj) dostupni klor 5g/L-10g/L dezinficijens koji sadrži klor;podovi, zidovi i površine predmeta koriste dostupni klor 1g/L dezinficijens s klorom: odjeća, posteljina i drugi tekstili najprije se natapaju u klornom dezinficijensu s 0,5g/L dostupnog klora 30 minuta, a zatim se čiste kao i obično.

Tablica 3. Učinak uklanjanja DNK različitih koncentracija klornog dezinficijensa

onečišćenje4

Rezultati ispitivanja pokazuju da: kada je učinkovita koncentracija klora veća ili jednaka 1,2 g/L, dezinficijens koji sadrži klor može potpuno razgraditi 100 kopija/μL plazmida kada se koristi 5 minuta.Kada djeluje 10 minuta, 84 dezinficijensa s učinkovitom koncentracijom klora većom ili jednakom 0,6 g/L može potpuno razgraditi 100 kopija/μL plazmida.

3. Pokus uklanjanja zraka onečišćenog aerosolom nukleinske kiseline

Kako očistiti zrak onečišćen aerosolima nukleinskih kiselina?Većina misli je stvoriti okoliš kontaminiran aerosolom i zatim ga očistiti, ili očistiti nukleinske kiseline nakon kontaminacije.Za mene je besmislen eksperiment koji se ne može ponoviti i rezultati eksperimenta se ne mogu kvantitativno analizirati, pa sam posudio neke metode dezinfekcijske dezinfekcije zraka.Pogledajte "GB27948-2020 Opći zahtjevi za sredstva za dezinfekciju zraka" i "Tehničke specifikacije za dezinfekciju"

1. Ispitni materijali

1.1 Sredstvo za uklanjanje DNK: U ovom eksperimentu odabrana su dva komercijalno dostupna sredstva za uklanjanje DNK 6 i 8 u tablici 1.

1.2 Testni plazmid: Uzimajući u obzir da će CT vrijednost većine laboratorijskih onečišćenja biti veća od 30, koncentracija plazmida gena ASFV koji se ovaj put koristi je oko 100 kopija/μL, a fluorescentni kvantitativni PCR CT je oko 31,07.Dodajte plazmid na štapić s vatom i osušite na zraku.

onečišćenje5

1.3 Instrument za testiranje: Instrument za dezinfekciju Bilingkehan KVBOX, koji je ljubazno podržao Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ima izvrsne performanse dezinfekcije zraka s dezinficijensom vodikovim peroksidom i može učinkovito ubiti spore i druge mikroorganizme.

onečišćenje6

1.4 Prostor za ispitivanje: zatvoreni prijenosni prozor od oko 0,1 kubičnog metra.

2. Metoda ispitivanja

onečišćenje7

Količina dezinficijensa postavljena na stroju za dezinfekciju je 10 ml, a koncentracija je 100 ml/m3, što je puno više od "GB27948-2020 Općih zahtjeva za dezinficijense zraka": kada se koristi dezinfekcija u spreju, količina dezinficijensa treba biti ≤10 ml/m3

onečišćenje8
onečišćenje10
onečišćenje9
onečišćenje11

Nakon prskanja je zapečaćen 2 sata, a zatim je flokirani obrisak s plazmidom eluiran TE, a flokirani obrisak s plazmidom bez fumigacije postavljen je kao kontrola.Za detekciju upotrijebite kvantitativnu PCR metodu fluorescencije.

Tablica 4 Rezultati testa uklanjanja nukleinske kiseline iz zraka

onečišćenje12

3. Rezultati ispitivanja

Dvije vrste sredstava za uklanjanje DNK koje mogu učinkovito razgraditi plazmide u tekućem stanju nemaju nikakav učinak u eksperimentu uklanjanja nukleinske kiseline iz zraka.Veselim se pronalaženju rješenja koje se može koristiti za uklanjanje onečišćenja aerosola nukleinske kiseline u zraku kako bi se u potpunosti riješio problem onečišćenja aerosolom nukleinske kiseline u laboratorijima za testiranje nukleinske kiseline, ali za sada nije pronađen nijedan takav proizvod.Vjerujem da će u budućnosti postojati visokoučinkoviti odstranjivači nukleinskih kiselina koji se mogu koristiti za uklanjanje nukleinskih kiselina iz zraka.

4. Odreknite se iluzija i usredotočite se na prevenciju

Bez obzira na to kako se tvrtke hvale svojim proizvodima za uklanjanje nukleinskih kiselina, predlažem da većina prijatelja koji se bave testiranjem nukleinskih kiselina jednom zauvijek odustanu od iluzija i prepoznaju stvarnost: vrlo je teško ukloniti zrak onečišćen aerosolima nukleinskih kiselina ili poduzmu solidnu preventivnu mjeru i svakodnevno praćenje radi!

onečišćenje13


Vrijeme objave: 10. rujna 2021