Laboratorijsko testiranje počinje uzimanjem uzorka, a uzimanje uzorka je najlakše previdjeti.Najvažnija stvar za prikupljanje uzorka je odabrati ispravnu vrstu uzorka, koristiti odgovarajuće alate za uzorkovanje i izvršiti razuman transport i obradu.

I. Vrsta uzorka

Uobičajene vrste uzoraka su sljedeće:

Metoda uzorkovanja može se odnositi na tehničke specifikacije za praćenje okoliša novog koronavirusa na poljoprivrednom trgovačkom (bazaru) tržištu”:

1. Uzorci briseva grla, ruku, odjeće i drugih predmeta liječnika: potrebno je koristiti otopinu za čuvanje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa i potpuno infiltrirati pamučne štapiće za uzorkovanje.Površina tla) se više puta nanosi i ispire više od 3 puta.Pritom je potrebno provesti višetočkovno distribuirano uzorkovanje na površini uzorkovanog objekta.

2. Uzorci briseva s površine hrane: Uzorci hrane ne mogu se prikupiti izravno.Hranu koju treba prikupiti treba pažljivo odvojiti i pohraniti u čistu vrećicu za uzorkovanje prije uzimanja uzoraka brisa.Potrebno je upotrijebiti otopinu za čuvanje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa, nakon potpunog natapanja pamučnog štapića za uzorkovanje, kako bi se opetovano premazalo i ispralo površinu uzorka hrane koji se prikuplja više od 3 puta.Pritom je potrebno izvršiti raspoređeno uzorkovanje u više točaka na površini uzorka.

3. Uzorci kanalizacije: U skladu s distribucijom sustava odvodnje na tržištu, odaberite 2-3 lokacije uzorkovanja kanalizacije, fokusirajući se na prikupljanje unutarnje mreže cijevi, nizvodno od smjera toka vode ili vezu s mrežom općinskih cijevi.Da biste uzeli uzorak brisa, uronite ga u kanalizaciju pomoću pamučnog štapića za uzorkovanje kako bi apsorbirao kanalizaciju i isperite ga u cijevi za uzorkovanje više od 3 puta.Za prikupljanje uzoraka otpadne vode koristite polietilenske plastične boce za prikupljanje uzoraka otpadne vode od 30-500 mL;za prikupljanje otpadnih voda s volumenom većim od 500 mL, mogu se koristiti polietilenske plastične kante ili posebna oprema za obogaćivanje uzoraka vode na licu mjesta.Istodobno je za mjesto uzorkovanja otpadnih voda potrebno provesti distribuirano uzorkovanje na više točaka.

4. Uzorci životinja: Za žive životinje, brisevi za uzorkovanje mogu se koristiti za uzimanje briseva s površine tijela, briseva orofaringeusa i anusa, a uzorci izlučevina ili sekreta također se mogu prikupiti i zabilježiti u skladu s tim na listiću.Za uzorke životinja s kojih je skinuta koža itd., upotrijebite pamučne štapiće za prikupljanje uzoraka s površine tijela i briseva tjelesnih šupljina.Potrebno je upotrijebiti otopinu za čuvanje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa kako bi se potpuno infiltrirao u pamučni štapić za uzorkovanje, a zatim ponoviti nanošenje površine uzorka hrane koji se uzima.Shabu više od 3 puta.Pritom je potrebno izvršiti raspoređeno uzorkovanje u više točaka na površini uzorka.

5. Ostali uređaji: spremnici za prijevoz i uzgoj životinja poput kaveza ili akvarija.Najprije promatrajte ili razumite specifične vrste životinja pohranjenih i uzgajanih u spremniku i prikupite uzorke briseva na unutarnjoj stijenci spremnika ili tekuće uzorke sadržaja.

6. Prikupite uzorke aerosola u područjima gdje se ljudi okupljaju, slabo prozračenim lokalnim trgovačkim prostorima, uredima i toaletima.

II.Alati za uzorkovanje
1. Epruveta za uzimanje krvi
Ako kasnije trebate obaviti testiranje nukleinske kiseline i uzorke antikoagulansa, preporučuje se korištenje vakuumske krvne žile koja sadrži EDTA antikoagulant za prikupljanje krvi;za uzorke seruma preporuča se korištenje vakuumske krvne žile bez antikoagulansa.

2. Bris za uzorkovanje

Preporuča se koristiti polipropilenske tupfere umjesto tupfera od kalcij alginata ili tupfera s drvenim motkama, jer mogu sadržavati tvari koje inaktiviraju određene viruse i inhibiraju PCR testiranje.Ne mogu se koristiti štapići s vatom, jer pamučna vlakna imaju jaku adsorpciju proteina i teško se eluiraju u kasniju otopinu za konzerviranje.

U “Tehničkim specifikacijama za 10-u-1 miješano prikupljanje i detekciju novih nukleinskih kiselina koronavirusa” jasno je propisano da “štap za uzorkovanje treba biti izrađen od poliestera, najlona i drugih materijala koji nisu pamuk i kalcijev alginat, a ručka treba biti izrađena od materijala koji nije od drveta.Točka pucanja je oko 3 cm od vrha glave štapića, što je lako slomiti."

CDC u Sjedinjenim Državama također je spomenuo “Koristite samo štapiće od sintetičkih vlakana s plastičnim ili žičanim držačima.Nemojte koristiti štapiće s kalcijevim alginatom ili briseve s drvenim drškama,budući da mogu sadržavati tvari koje inaktiviraju neke viruse i inhibiraju PCR testiranje.

Trenutačno se naširoko koristi jednokratni sterilni najlonski štapić za flokiranje u kombinaciji s plastičnim štapićem.Flocking štapić ima bolju apsorpciju vode i brzinu otpuštanja.Ovisno o različitim mjestima uzorkovanja, glava brisa također ima različite veličine i vlakna.Debljina.”

3. Uzorak otopine za očuvanje transporta

Otopina za očuvanje inaktivacije virusa: odgovarajuća količina koncentracije soli gvanidina i razne komponente za lizu virusa mogu izravno lizirati virus kako bi se oslobodila nukleinska kiselina, inaktivirala RNaza i DNaza i osigurala cjelovitost nukleinske kiseline, koja se može koristiti za kasniju qPCR detekciju.Ne može se koristiti za uzgoj i izolaciju virusa.

Otopina za transport i očuvanje virusa: sadrži soli, aminokiseline, vitamine, glukozu i proteine ​​potrebne za preživljavanje virusa, koji mogu održavati aktivnost virusa.Može se koristiti za ekstrakciju nukleinske kiseline i detekciju virusa u budućnosti, a također se može koristiti za uzgoj i odvajanje virusa.

4. Epruveta za čuvanje uzoraka i vrećica za uzorke

Epruveta za pohranu uzorka trebala bi biti sterilna plastična epruveta s čepom na navoj koja ne adsorbira nukleinsku kiselinu.Svaku epruvetu s uzorkom treba prekriti vrećicom za uzorke kako bi se spriječilo curenje i kontaminacija uzorka.

III.Interferirajuće tvari u uzorku

Interferirajuće tvari u PCR pokusima

1. endogeni ometač

Tvari prisutne u uzorku tijela mogu ometati otkrivanje drugih tvari.

Krv:hem (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), trigliceridi, IgG itd.;

Urin:Urea (20 mM);

Stolica:biljni polisaharidi, kolat;

Tkivo:proteaza, kolagen;

Mlijeko: proteaza, kalcijev ion;

Droge: antibiotici, antivirusni lijekovi, hormoni itd.

drugo.

2. egzogeni ometač

Dolazi od tvari koje mogu ometati otkrivanje drugih tvari in vitro.Dodaci uzorcima i tvari koje se mogu kontaktirati tijekom prikupljanja i obrade uzorka:

Ispitni pribor: gel za odvajanje seruma, spremnik za prikupljanje uzorka i gumeni čep, kateter, tekućina za ispiranje katetera, puder za rukavice, itd.

Antikoagulans: heparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), itd.;

Organska otapala: izopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil sulfoksid, formamid, glicerin, PEG, itd.;

Sredstva za dezinfekciju: alkoholi (etanol>1%), aldehidi, fenoli (fenol>0,2%), peroksidi, jake kiseline (HCL), jake lužine (NaOH) itd.;

Deterdžent:SDS (>0,005%);

Tlo: Humus

bojilo: Indigo

drugo.

U stvarnim uvjetima uzorkovanja na otvorenom, kao što je prikupljanje uzoraka iz okoliša, uzorci mogu sadržavati različite interferentne tvari, a sastav interferentnih tvari na svakoj lokaciji je drugačiji, što zahtijeva provođenje PCR interferencijskih eksperimenata u skladu s lokalnim uvjetima.

IV.Uvjeti skladištenja i prijevoza uzoraka

Svježe prikupljene kliničke uzorke treba poslati u laboratorij unutar 2 do 4 sata nakon prikupljanja na 2°C do 8°C.Čuvati na 4 ℃ unutar 24 sata.Uzorke koji se koriste za izolaciju virusa i detekciju nukleinske kiseline potrebno je testirati što je prije moguće.Uzorci koji se mogu testirati unutar 24 sata mogu se čuvati na 4°C;uzorke koji se ne mogu detektirati u roku od 24 sata treba pohraniti na -70°C ili niže (ako nije - Čuvati na 70°C u hladnjaku na -20°C).

Sažetak:Standardizirano prikupljanje, transport i skladištenje uzoraka ključni su za naknadno testiranje.Lažno negativni rezultati mnogih laboratorijskih testova uzrokovani su nepravilnim prikupljanjem, transportom i skladištenjem uzoraka koji dovode do razgradnje virusne nukleinske kiseline.Međutim, mnogi laboratoriji još uvijek zanemaruju važnost uzorkovanja.Nadam se da ovaj članak može probuditi svačiju pozornost na uzorkovanje i napraviti znanstveno i razumno uzorkovanje!

Povezani proizvod:

Komplet za otkrivanje varijante SARS-CoV-2 nukleinske kiseline (I) (metoda multipleksne PCR fluorescentne sonde) - za otkrivanje mutanata iz Brazila, Južne Afrike i Ujedinjenog Kraljevstva