• facebook
  • linkedin
  • youtube

Koliko znaš

O Nekstrakcija ukleinske kiseline

Početak i kraj pročišćene nukleinske kiseline

Sve je teško na početku, pročišćena nukleinska kiselina najviše

Započinjanje molekularnih eksperimenata, za naknadne eksperimente

Uspjeh ili neuspjeh ima presudan utjecaj.

Trace/ultratrace UV spektrofotometar favoriziraju mnogi znanstveni istraživači jer može detektirati koncentraciju nukleinske kiseline i ionske ostatke proteina i soli jednostavno, brzo i ekonomično.

Kao što svi znamo, A260 znači OD vrijednost apsorbancije nukleinske kiseline, A280 znači OD vrijednost apsorbancije koncentracije proteina, A230 znači OD vrijednost apsorbancije koncentracije iona soli, tako da A260 može pretvoriti koncentraciju nukleinske kiseline, A260/280 znači ostatak proteina, A260/230 znači ostatak iona soli, ali ovo je samo pravilo koje su otkrili istraživači na temelju velikog broja rezultata mjerenja, a to je ”konvencionalne” vjerovati da može objasniti čistoću DNK i RNKodređenoj mjeri.To nije jedini standard za identifikaciju prinosa i čistoće nukleinske kiseline, koristi se samo kao referenca i nije "zlatni standard".

derthfd (1)

Thermo Fisher ND-2000 priručnik naglašava pouzdanost rezultata ispitivanja

Razlog je taj što rezultati dobiveni uporabom mikro/ultramikro UV spektrofotometra samo odražavaju prinos i čistoću nukleinske kiseline sa strane, a postoji mnogo čimbenika koji utječu (optički put, volumen uzorka, koncentracija uzorka, pH vrijednost, drugi ioni koji utječu na mjerenje apsorbancije, itd.), izmjerena vrijednost OD nije nužno točna.U isto vrijeme, zbog nedostatka specifičnosti materijala za određivanje vrijednosti apsorbancije, jednolančana DNA, dvolančana DNA, RNA, dNTP i neki proteini imaju maksimum apsorpcije na valnoj duljini od 260 nm, a koncentracija određena samo A260 nije nužno stvarna DNA ili RNA.Koncentracija, te njezina cjelovitost i degradacija ne mogu se suditi.

Dakle, kako procijeniti kvalitetu naše pročišćene nukleinske kiseline?Uz korištenje mikro/ultramikro UV spektrofotometra za detekciju, metode kao što je elektroforeza u agaroznom gelu također su potrebne za vizualni prikaz čistoće i cjelovitosti nukleinske kiseline, te za označavanje koncentracije do određene mjere.Na taj su način prinos i čistoća nukleinske kiseline dobiveni iz rezultata detekcije različitim metodama vjerodostojni.

Usporedba eksperimentalne karte

derthfd (2)

Genomska DNK stanica H1299 ekstrahirana je korištenjem kompleta za ekstrakciju DNK tvrtke A i uočena je značajna kontaminacija nečistoćama, što je rezultiralo visokim vrijednostima OD

(mjerna vrijednost OD i odgovarajući elektroferogram)

Indeks ocjenjivanja

Postoji li "zlatni standard" za prinos nukleinske kiseline i ispitivanje kvalitete?

Koliko znamo, ne postoji jednostavna, brza i jeftina metoda.Bilo da se radi o spektrofotometru, gel elektroforezi ili masenoj spektrometriji, sve one odražavaju koncentraciju i čistoću nukleinske kiseline u otopini s različitih aspekata, te ih je potrebno prosuđivati ​​u odnosu jedna na drugu.

Najbolji indeks ocjene je uvijeknaknadna eksperimentalna primjena.Ne utječe na učinkovitost reverzne transkripcije i PCR amplifikacije.Dobivanje pouzdanih proizvoda amplifikacije i vrijednosti Ct te dobivanje kompletne sekvence sekvenciranjem je uspješna ekstrakcija nukleinske kiseline.

Da sažmemo, gledište teorije samo omjera trebalo bi dovesti u pitanje gledištem o "korištenju dobrih eksperimentalnih rezultata nizvodno kao dobrih parametara ekstrakcije"!

Preporučeni Foregene kompleti za ekstrakciju DNA RNA za postizanje visoke čistoće DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/


Vrijeme objave: 14. prosinca 2022