• facebook
  • linkedin
  • youtube

1:Zamijenite eksperimentalne zalihe na vrijeme

vijesti812 (1) 

Postavite (NTC) negativnu kontrolu i ponovite je više puta.Nakon što se utvrdi da postoji kontaminacija PCR produkta u laboratoriju, zamijenite sve eksperimentalne zalihe na vrijeme.Kao što su: ponovno razrijediti i pripremiti primere, ponovno sterilizirati vrh pipete, EP epruvetu, ddH2O itd., zamijeniti novom pipetom i privremeno posuditi druge laboratorije za izvođenje PCR eksperimenata.Prije nastavka pokusa kontaminirani laboratorij mora biti ventiliran i ozračen ultraljubičastim zrakama sve dok se ne eliminira kontaminacija PCR produktom.

2:Produžite vrijeme izlaganja UV zračenju

vijesti812 (2)

Vrijedno je napomenuti da bi se za uklanjanje kontaminacije DNK redovito ultraljubičasto zračenje trebalo produljiti za 2 sata nego inače.Unatoč tome, učinak UV zračenja na uklanjanje malih fragmenata (ispod 200 bp) kontaminacije DNA još uvijek nije dobar.

Ultraljubičasta valna duljina (nm) općenito je 254/300nm, a dovoljno je zračiti 30 minuta.Treba napomenuti da pri odabiru UV radi uklanjanja kontaminacije rezidualnih PCR proizvoda treba uzeti u obzir duljinu PCR produkta i distribuciju baza u nizu proizvoda.UV zračenje je učinkovito samo za duge fragmente iznad 500 bp, a ima mali učinak na kratke fragmente.

Tijekom UV zračenja, pirimidinske baze u PCR produktu formirat će dimere.Ovi dimeri mogu prekinuti produženje, ali ne mogu svi pirimidini u lancu DNA formirati dimere, a UV zračenje također može razbiti dimere..Stupanj stvaranja dimera ovisi o UV valnoj duljini, tipu pirimidinskog dimera i slijedu nukleotida uz mjesto dimera.Stoga, ako su PCR amplificirani fragmenti mali, preporučuje se korištenje UNG anti-PCR sustava kontaminacije proizvoda.

3:Uobičajeno korišteni čistači onečišćenja DNK

vijesti812 (3)

Aerosoli se lako stvaraju kada se dodaju pipete, što je teško izbjeći, a brzo će se taložiti.Stoga je nedvojbeno dobar izbor često koristiti posebne čistače onečišćenja DNA kako bi se spriječilo širenje onečišćenja DNA.

4:Koristite UNG sustav protiv zagađenja

vijesti812 (4)

Nakon uklanjanja kontaminacije PCR proizvodom, ispitni laboratorij može koristiti UNG anti-PCR sustav za kontaminaciju proizvoda kako bi spriječio kontaminaciju PCR proizvodom.U općim laboratorijima možete izvesti jednostavne eksperimentalne podjele, strogo odvojiti područje PCR proizvoda od ostalih područja, uspostaviti određena laboratorijska pravila i propise te provesti odgovarajuću obuku kako biste spriječili pojavu kontaminacije PCR proizvodom.

Preporuke: Uspostavljanje razumnog PCR laboratorija, održavanje dobrog PCR okruženja, formuliranje standardnih PCR operativnih postupaka i njegovanje rigorozne operativne svijesti eksperimentatora ključni su za sprječavanje ili smanjenje onečišćenja PCR eksperimenata.


Vrijeme objave: 12. kolovoza 2021