W:Brate, reverzna transkripcija je gotova i konačno zadnji korak – fluorescentni kvantitativni PCR!Hej, brate, što je kvantitativni PCR u stvarnom vremenu?
M:PCR uvijek znaš, zar ne?
W: Znate, PCR je lančana reakcija polimerazom, a to je tehnologija koja povećava DNK!
M: Skoro je... To je tehnička metoda za pojačavanje ciljne sekvence više od milijun puta kroz specifične početnice, ali to samo ukazuje na prisutnost ili odsutnost ciljne sekvence, a ne može odrediti količinu početnog predloška.Fluorescencijski kvantitativni PCR tehnička je metoda razvijena za rješavanje ovog problema.PCR u stvarnom vremenu i kvantitativni PCR (qPCR) općenito se odnose na njega.
W: Razlika od običnog PCR-a je u kvantifikaciji fluorescencije?
M: Da, to jest, u produžetku svakog PCR ciklusa detektira se intenzitet signala fluorescencije, a početna količina uzorka može se izračunati prema promjeni intenziteta signala.
W: Čini se tako komplicirano!Moram li to sam izračunati?
M: Ovo zahtijeva da učite polako, najbolje je razumjeti princip.Sada se prvo možete usredotočiti na CT vrijednost, što je relativno intuitivan eksperimentalni podatak, a njegova veličina odgovara veličini početnog iznosa predloška.Tu su i grafikoni kao što su krivulje pojačanja i krivulje taljenja.Oni imaju posljednju riječ o tome je li vaš eksperiment uspješan ili ne.
W: Oh, brate.Onda ću napraviti qPCR eksperiment!
M: Obratite posebnu pozornost da ne dodate šablone u područje reagensa, inače će se vaša neiskorištena mješavina lako kontaminirati!
W: Shvaćam!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Veća učinkovitost, veća specifičnost
Visoka osjetljivost, dobra kompatibilnost