Sljedeća analiza mogućih problema uBukalnoobrisak/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Kolona za pročišćavanje je začepljena

U ovom se kompletu, u operaciji ekstrakcije genomske DNA, kolona za pročišćavanje izravno adsorbira na smjesu za enzimsku lizu uzorka bez koraka centrifugiranja, a kolona za pročišćavanje može biti blokirana zbog nepotpune enzimizacije i visoke viskoznosti uzorka.

Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:

1. Nepotpuna enzimska probava uzoraka tkiva.

Preporuka: Vrijeme obrade uzorka Foregene Protease može se odgovarajuće produljiti ili se supernatant može uzeti nakon centrifugiranja na 12.000 okretaja u minuti (~13.400× g) 5 min.

2. Pretjerano korištenje uzoraka tkiva ili velikih tkiva.

Preporuka: Najbolje je ne premašiti 1Bukalno bris u uzorku;ako je uzorak prevelik, povećajte dozu pufera ST1, Foregene Protease, pufera ST2 u skladu s tim.

3. Viskoznost uzorka je previsoka.

Preporuka: Uzorci se mogu primjereno razrijediti s 10 mM Tris-HCl prije ekstrakcije genomske DNA.

4. Isisani su fragmenti krvne kartice.

Preporuka: Prijelazno vrijeme centrifugiranja koraka 6 genomske ekstrakcije mrljama krvi (FTA kartica) može se odgovarajuće produžiti.

Nizak prinos ili bez DNK

Često postoje različiti čimbenici koji utječu na prinos genomske DNA, uključujući podrijetlo uzorka, uvjete skladištenja uzorka, pripremu uzorka, manipulaciju itd.

Genomska DNK se ne može dobiti tijekom ekstrakcije

Mogući uzroci su sljedeći:

1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNA.

Preporuka: Oralne briseve po mogućnosti treba uzeti svježe, a nije preporučljivo koristiti konzervirane briseve za operacije ekstrakcije genomske DNA;uzorci krvnih mrlja trebaju osigurati odgovarajuću kvalitetu i vrijeme skladištenja ne smije biti predugo.

2. Premala upotreba tkiva može rezultirati izostankom ekstrakcije odgovarajuće genomske DNA.

Preporuka: Slijeditebuccal uzmite upute za uzorkovanje u uputama za rad i obrišite što je moguće više puta kako bi se dovoljno stanica moglo pričvrstiti na oralni obrisak za ekstrakciju genomske DNK;za ekstrakciju uzorka mrlje krvi, područje rezanja mrlja krvi može se odgovarajuće povećati.

3. Foregene Protease je nepropisno očuvana, što rezultira smanjenjem njezine aktivnosti ili inaktivacijom.

Preporuka: Provjerite uvjete skladištenjaForegene Protease ili je zamijenite novom Foregene Protease za enzimsku reakciju.

4. Neispravno čuvanje kompleta ili vrijeme skladištenja je predugo, što rezultira kvarom nekih komponenti u kompletu.

Preporuka: Kupite noviBukalno bris DNAizolacija kit za srodne postupke.

5. Pufer WB ne dodaje apsolutni etanol.

Preporuka: potvrdite da pufer WB dodaje točan volumen apsolutnog etanola.

6. Eluens nije pravilno dodan u silikonski film.

Preporuka: Dodati 65°Cprethodno zagrijani eluent pada na sredinu silikonske membrane i ostavlja se na sobnoj temperaturi 5 minuta kako bi se povećala učinkovitost eluiranja.

Low-yield genomska DNA izolirani

Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:

1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNA.

Preporuka: Oralne briseve je poželjno uzeti svježe uzorkovane, a konzervirane briseve ne treba koristiti za ekstrakciju genomske DNA.

2. Ako je količina uzorka tkiva premala, sadržaj ekstrahirane genomske DNA bit će manji.

Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje oralnog brisa u uputama za rad, brišite što je moguće više puta kako bi se dovoljno stanica moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK.

3. Foregene Protease je nepropisno očuvana, što rezultira smanjenjem njezine aktivnosti ili inaktivacijom.

Preporuka: Provjerite uvjete skladištenjathe Foregensku proteazu ili je zamijenite novom Foregene proteaza za enzimsku reakciju.

4. Problemi s eluentom.

Preporuka: Koristite pufer EB za ispiranje;ako koristite ddH₂O ili drugim eluensima, potvrdite da je pH eluata između 7,0-8,5.

5. Eluat nije pravilno dodan kap po kap.

Preporuka: Dodajte kapi eluensa na sredinu silikonske membrane i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali učinkovitost eluiranja.

6. Tekućina za ispiranje nakuplja se premalo.

Preporuka: Koristite eluens za eluiranje genomske DNA kako je propisano u uputama, najmanjene manje od 15μl.

Lvu čistoću of genomska DNKizolirani

Niska čistoća genomske DNA može dovesti do neuspjeha ili nezadovoljavajućih rezultata daljnjih eksperimenata, kao što su: enzimi se ne mogu otvoriti, PCR ne može dobiti fragment gena od interesa, itd.

Mogući uzroci su sljedeći:

1. Onečišćenje heteroproteinima, onečišćenje RNA.

Analiza: Kolona za pročišćavanje nije isprana puferom PW;kolona za pročišćavanje ispiranjem pufera PW nije isprana ispravnom centrifugalnom brzinom.

Preporuka: Osigurajte da u supernatantu nema taloga prije dodavanja etanola;svakako operite kolonu za pročišćavanje u skladu s uputama, a ovaj se korak ne može izostaviti.

2. Zagađenje ionima nečistoće.

Analiza: kolona za pročišćavanje ispiranjem pufera WB izostavljena je ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.

Preporuka: Obavezno isperite Buffer WB 2 puta prema uputama kako biste uklonili zaostale ione što je više moguće.

3. Kontaminacija RNA enzima.

Analiza: strane RNaze su dodane u pufer;Operacija ispiranja pufera PW bila je netočna, što je rezultiralo ostacima RNaze, što je utjecalo na nizvodne eksperimentalne operacije RNA, kao što je in vitro transkripcija.

Preporuka: Foregene serija nukleinske kiselineizolakompleti mogu ukloniti RNK bez dodatnog dodavanja RNaze,Tako komplet za izolaciju DNK bukalnog brisa/FTA karticepotrebno't dodati RNazu;svakako slijedite upute za kolonu za pročišćavanje ispiranjem pufera PW i ovaj se korak ne smije izostaviti.

4. Ostatak etanola.

Analiza: Pufer WB nije izvršio centrifugiranje prazne epruvete nakon pranja kolone za pročišćavanje.

Preporuka: Izvedite ispravnu operaciju centrifugiranja prazne epruvete prema uputama.

5. Zagađenje drugim nečistoćama.

Analiza: Spremljeni uzorci ili posebni uzorci nisu prethodno tretirani.

Preporuka: temeljito prethodno obradite uzorak prema uputama.