FAQ je zaKomplet za izolaciju ukupne životinjske RNK
Sljedeća analiza problema na koje možete naićiekstrakcija RNA životinjskog tkiva/stanice will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
RNA nije ekstrahirana ili su prinosi RNA niski
Često postoje različiti čimbenici koji utječu na učinkovitost oporavka, kao što su: sadržaj RNA u uzorku tkiva, način rada, volumen elucije itd.
1. Tijekom rada provedena je ledena kupelj ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje.
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25 °C) tijekom cijelog procesa, ne koristite ledenu kupku i centrifugirajte na niskim temperaturama.
2. Nepravilno čuvanje uzorka ili predugo vrijeme čuvanja uzorka.
Preporuka: Pohranite uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovljenu upotrebu zamrzavanjem-otapanjem;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.
3. Nedovoljna liza uzorka.
Preporuka: Prilikom homogeniziranja tkiva, osigurajte da je tkivo dovoljno homogenizirano i da su stanice tkiva dovoljno podijeljene da bi se objasnilo oslobađanje RNK.
4. Eluens nije pravilno dodan.
Preporuka: potvrdite da je ddH bez RNaze2O se dodaje kap po kap u sredinu membrane kolone za pročišćavanje.
5. Točan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer RL2 ili pufer RW2.
Preporuka: Slijedite upute, dodajte točan volumen apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Doziranje uzorka tkiva nije odgovarajuće.
Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 106stanica po 500 μl pufera RL1, budući da pretjerana uporaba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNA.
7. Neodgovarajući volumen eluacije ili nepotpuna elucija.
Preporuka: Volumen eluacije kolone za pročišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNaze2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za pročišćavanje ima ostatke etanola nakon ispiranja puferom RW2.
Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugirajte praznu epruvetu 1 minutu, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.
Pročišćena RNA se razgrađuje
Kvaliteta pročišćene RNA povezana je s čimbenicima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNazom i manipulacija, itd.
1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili stanice ne iskoriste na vrijeme nakon prikupljanja, odmah ih kriokonzervirajte na -80 °C ili u tekućem dušiku.Za izdvajanje RNK, upotrijebite tek uzeti uzorak tkiva ili stanice kad god je to moguće.
2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Kada pohranjujete uzorke tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja i ukloniti jedan od dijelova kada ih koristite kako biste izbjegli ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i razgradnju RNK.
3. RNaza se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tijekom operacije.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim sobama za manipulaciju RNK, a stol se očisti prije eksperimenta.
Nosite jednokratne rukavice i maske tijekom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNaze.
4. Reagensi su kontaminirani RNazom tijekom upotrebe.
Preporuka: Zamijenite novim Kompletom za izolaciju ukupne životinjske RNA za povezane pokuse.
5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u manipulaciji RNK kontaminirani su RNazom.
Preporuka: potvrdite da epruvete za centrifugiranje, vrhovi, pipete itd. koji se koriste u ekstrakciji RNA ne sadrže RNaze.
Pročišćena dobivena RNA utječe na nizvodne eksperimente
RNA pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je sadržaj iona soli, proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što je: reverzna transkripcija, Northern Blot et al.
1. Eluirana RNA ima ostatke iona soli.
Preporuka: potvrdite da je točan volumen etanola dodan u pufer RW2 i izvedite 2 ispiranja kolone za pročišćavanje centrifugalnom brzinom naznačenom za rad;ako ima ostataka iona soli, ostavite kolonu za pročišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.
2. Ostatak etanola u eluiranoj RNA.
Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete pri brzini centrifugiranja navedenoj za rad, produžite vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja prazne epruvete kako biste maksimizirali uklanjanje ostataka etanola.
Izolacija vrsta uzoraka nulceinske kiseline
Foregene kompleti za izolaciju RNA mogu dobiti potpunu izolaciju/ekstrakciju RNA iz sljedećih izvora uzoraka: životinjsko tkivo, biljke, stanice, virusi, krv itd.
Kako čuvam komplet
Čuvanje na sobnoj temperaturi 24 mjeseca.
Vrijeme objave: 1. ožujka 2022
