Antitijela, koja se nazivaju i imunoglobulini (Ig), su glikoproteini koji se specifično vežu na antigene.
 
Konvencionalni pripravak protutijela proizvodi se imunizacijom životinja i prikupljanjem antiseruma.Stoga antiserum obično sadrži antitijela protiv drugih nepovezanih antigena i drugih proteinskih komponenti u serumu.Molekule općeg antigena uglavnom sadrže više različitih epitopa, pa su konvencionalna antitijela također mješavina antitijela protiv više različitih epitopa.Čak su i konvencionalna antitijela u serumu usmjerena protiv istog epitopa još uvijek sastavljena od heterogenih antitijela proizvedenih od strane različitih klonova B stanica.Stoga se konvencionalna antitijela u serumu nazivaju i poliklonska antitijela ili skraćeno poliklonska antitijela.
 
Monoklonsko protutijelo (monoklonsko protutijelo) visoko je uniformno protutijelo koje proizvodi jedan klon B stanica i usmjereno je samo protiv specifičnog epitopa.Obično se priprema tehnologijom hibridoma—tehnologija antitijela hibridoma temelji se na tehnologiji stapanja stanica, kombinirajući B-stanice sa sposobnošću lučenja specifičnih antitijela i stanice mijeloma s beskonačnim kapacitetom rasta u B-stanične hibridome.Ova stanica hibridoma ima karakteristike matične stanice.Može se beskonačno i besmrtno razmnožavati in vitro poput stanica mijeloma, a može sintetizirati i izlučivati ​​specifična protutijela poput limfocita slezene.Kloniranjem se može dobiti monoklonska linija izvedena iz jedne hibridomske stanice, odnosno hibridomska stanična linija.Antitijela koja proizvodi su visoko homogena antitijela protiv iste antigene determinante, odnosno monoklonska antitijela.
 
Antitijela postoje kao jedan ili više monomera u obliku slova Y (tj. monoklonska antitijela ili poliklonska antitijela).Svaki monomer u obliku slova Y sastoji se od 4 polipeptidna lanca, uključujući dva identična teška lanca i dva identična laka lanca.Laki lanac i teški lanac nazivaju se prema njihovoj molekularnoj težini.Vrh strukture u obliku slova Y je varijabilna regija, koja je mjesto vezivanja antigena.(Izvadak iz Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Struktura antitijela
Teški lanac
Postoji pet tipova Ig teških lanaca sisavaca, nazvanih grčkim slovima α, δ, ε, γ i μ.Odgovarajuća antitijela nazivaju se IgA, IgD, IgE, IgG i IgM.Različiti teški lanci razlikuju se po veličini i sastavu.α i γ sadrže približno 450 aminokiselina, dok μ i ε sadrže približno 550 aminokiselina.
Svaki teški lanac ima dvije regije: konstantnu regiju i varijabilnu regiju.Sva protutijela iste vrste imaju istu konstantnu regiju, ali postoje razlike između protutijela različitih vrsta.Konstantna područja teških lanaca γ, α i δ sastavljena su od tri Ig domene u tandemu, sa zglobnom regijom koja povećava njihovu fleksibilnost;konstantne regije teških lanaca μ i ε sastavljene su od 4 Ig domene.Varijabilna regija teškog lanca antitijela koju proizvode različite B stanice je različita, ali je varijabilna regija antitijela koju proizvode iste B stanice ili stanični klon ista, a varijabilna regija svakog teškog lanca duga je oko 110 aminokiselina.i tvore jednu Ig domenu.
 
Lagani lanac
Kod sisavaca postoje samo dvije vrste lakih lanaca: lambda tip i kapa tip.Svaki laki lanac ima dvije povezane domene: konstantnu regiju i varijabilnu regiju.Duljina lakog lanca je oko 211-217 aminokiselina.Dva laka lanca sadržana u svakom antitijelu uvijek su ista.Za sisavce, laki lanac u svakom antitijelu ima samo jednu vrstu: kapa ili lambda.Kod nekih nižih kralježnjaka, kao što su hrskavičnjače (ribe hrskavice) i ribe koštunjače, nalaze se i druge vrste lakih lanaca kao što je jota (jota).
 
Fab i Fc segmenti
Fc segment se može izravno kombinirati s enzimima ili fluorescentnim bojama za označavanje antitijela.To je dio gdje se antitijelo spaja na ploču tijekom ELISA procesa, a to je također dio gdje se drugo antitijelo prepoznaje i veže u imunoprecipitaciji, imunoblotingu i imunohistokemiji.Antitijela se mogu hidrolizirati u dva F(ab) segmenta i jedan Fc segment pomoću proteolitičkih enzima kao što je papain, ili se mogu odvojiti od zglobne regije pomoću pepsina i hidrolizirati u jedan F(ab)2 segment i jedan Fc segment.Fragmenti IgG antitijela ponekad su vrlo korisni.Zbog nedostatka Fc segmenta, F(ab) segment neće precipitirati s antigenom, niti će ga imunološke stanice uhvatiti u studijama in vivo.Zbog malih molekularnih fragmenata i nedostatka funkcije unakrsnog povezivanja (zbog nedostatka Fc segmenta), Fab segment se obično koristi za radiooznačavanje u funkcionalnim studijama, a Fc segment se uglavnom koristi kao sredstvo za blokiranje u histokemijskom bojenju.
 
Varijabilna i konstantna područja
Varijabilna regija (V regija) nalazi se na 1/5 ili 1/4 (sadrži oko 118 aminokiselinskih ostataka) H lanca blizu N-terminusa i 1/2 (sadrži oko 108-111 aminokiselinskih ostataka) blizu N-terminusa L lanca.Svaka V regija ima peptidni prsten formiran disulfidnim vezama unutar lanca, a svaki peptidni prsten sadrži otprilike 67 do 75 aminokiselinskih ostataka.Sastav i raspored aminokiselina u V regiji određuju specifičnost vezanja antigena antitijela.Zbog stalne promjene tipova i sekvenci aminokiselina u V regiji, mogu se formirati mnoge vrste antitijela s različitim specifičnostima vezanja antigena.V regije L lanca i H lanca nazivaju se VL odnosno VH.U VL i VH, aminokiselinski sastav i sekvenca nekih lokalnih regija imaju veći stupanj varijacije.Te se regije nazivaju hipervarijabilne regije (HVR).Sastav aminokiselina i raspored dijelova koji nisu HVR u V regiji su relativno konzervativni, što se naziva okvirna regija.Postoje tri hipervarijabilne regije u VL, obično smještene na aminokiselinskim ostacima 24 do 34 odnosno 89 do 97.Tri HVR-a VL i VH nazivaju se HVR1, HVR2 i HVR3.Istraživanje i analiza rendgenske kristalne difrakcije dokazalo je da je hipervarijabilna regija doista mjesto na koje se veže antigen antitijela, pa se naziva komplementarnost-determinirajuća regija (CDR).HVR1, HVR2 i HVR3 od VL i VH mogu se nazvati CDR1, CDR2 i CDR3 redom.Općenito, CDR3 ima viši stupanj hipervarijabilnosti.Hipervarijabilna regija također je glavno mjesto gdje postoje idiotipske determinante Ig molekula.U većini slučajeva H lanac igra važniju ulogu u vezivanju na antigen.
Konstantno područje (C područje)nalazi se na 3/4 ili 4/5 (otprilike od aminokiseline 119 do C terminala) H lanca blizu C kraja i 1/2 (sadrži oko 105 aminokiselinskih ostataka) blizu C kraja L lanca.Svaka funkcionalna regija H lanca sadrži oko 110 aminokiselinskih ostataka i sadrži peptidni prsten sastavljen od 50-60 aminokiselinskih ostataka povezanih disulfidnim vezama.Sastav aminokiselina i raspored ove regije relativno su konstantni u istom životinjskom Ig izotipu L lanca i istom tipu H lanca.Isti, može se samo specifično vezati za odgovarajući antigen, ali mu je struktura C regije ista, odnosno ima istu antigenost.Konjsko anti-ljudsko IgG sekundarno antitijelo (ili anti-antitijelo) može se kombinirati s dva. Dolazi do kombinacije antitijela (IgG) protiv različitih egzotoksina.Ovo je važna osnova za pripremu sekundarnih antitijela i primjenu fluoresceina, izotopa, enzima i drugih obilježenih antitijela.
 
 
Povezani proizvodi:
Komplet Cell Direct RT-qPCR