Komplet za izolaciju DNK bukalnog brisa/FTA kartice Komplet za ekstrakciju ili pročišćavanje genomske DNK iz bukalnih briseva
Opis kompleta:
Brzo pročistite visokokvalitetnu genomsku DNK iz uzoraka bukalnog brisa/FTA kartice.
◮Nema kontaminacije RNazom:Stupac samo za DNA koji se nalazi u kompletu omogućuje uklanjanje RNA iz genomske DNA bez dodavanja RNaze tijekom eksperimenta, sprječavajući kontaminaciju laboratorija egzogenom RNazom.
◮Velika brzina:Foregene Protease ima veću aktivnost od sličnih proteaza i brzo probavlja uzorke tkiva;operacija je jednostavna, a operacija ekstrakcije genomske DNA može se završiti unutar 20-80 minuta.
◮Zgodno:Centrifugiranje se provodi na sobnoj temperaturi i nema potrebe za centrifugiranjem na niskoj temperaturi od 4°C ili taloženjem DNA etanolom.
◮Sigurnost:Nije potrebna ekstrakcija organskog reagensa.
◮Visoka kvaliteta:Ekstrahirana genomska DNA ima velike fragmente, nema RNA, nema RNAze i iznimno nizak sadržaj iona, što može zadovoljiti zahtjeve raznih eksperimenata.
◮Sustav mikro eluiranja:Može povećati koncentraciju genomske DNA, što je prikladno za daljnju detekciju ili eksperiment.
Opis
Ovaj komplet pruža učinkovitu i brzu metodu za dobivanje genomske DNK visoke koncentracije iz bukalnih briseva i FTA kartice (krvne mrlje).Koristeći našu tvrtku'S jedinstvenom spin kolonom i formulom sa silika membranom samo za DNA, u kombinaciji s Foregene proteazom, visoka koncentracija, visokokvalitetna genomska DNA može se ekstrahirati u 80 minuta.Posebno dizajnirana mala kolona za pročišćavanje veže genomsku DNK, a DNK se može eluirati malom količinom (15μl) elucijski sustav za povećanje koncentracije dobivene genomske DNA, što je prikladno za daljnju detekciju ili eksperiment.Komplet može obraditi jedan ili više uzoraka odjednom, a proces pročišćavanja ne zahtijeva ekstrakciju organskih tvari kao što su fenol, kloroform i dugotrajno taloženje izopropanolom ili etanolom, a operacija je jednostavna i štedi vrijeme.
Tehnički podaci
50 Preps
Komponente kompleta
| Međuspremnik ST1 |
| Međuspremnik ST2 |
| Linearni akrilamid |
| Međuspremnik PW |
| Međuspremnik WB |
| Međuspremnik EB |
| Foregene proteaza |
| Stupac samo za DNK |
| upute |
Značajke i prednosti
-Bez kontaminacije RNazom: Stupac samo DNA koji se isporučuje u kompletu omogućuje uklanjanje RNK iz genomske DNK bez dodavanja RNaze tijekom eksperimenta, čime se izbjegava kontaminacija laboratorija egzogenom RNazom.
-Velika brzina: Foregene Protease ima veću aktivnost od sličnih proteaza, brzo probavlja uzorke;jednostavan rad.
-Praktično: centrifugiranje se izvodi na sobnoj temperaturi i nema potrebe za centrifugiranjem na niskoj temperaturi od 4°C ili taloženjem DNA etanolom.
-Sigurnost: nije potrebna ekstrakcija organskog reagensa.
-Visoka kvaliteta: Ekstrahirana genomska DNK ima velike fragmente, nema RNK, nema RNaze i izuzetno nizak sadržaj iona, što može zadovoljiti zahtjeve raznih eksperimenata.
-Mikro-elucijski sustav: može povećati koncentraciju genomske DNA, što je prikladno za nizvodnu detekciju ili eksperiment.
Primjena kompleta
Pogodan je za pročišćavanje genomske DNA iz sljedećih uzoraka: bukalni brisevi, FTA kartica (krvne mrlje).
Skladištenje i rok trajanja
-Ovaj komplet može se čuvati 12 mjeseci u suhim uvjetima na sobnoj temperaturi (15-25°C);ako je potrebno dulje skladištenje, može se čuvati na 2-8°C.
Napomena: Ako se skladišti na niskoj temperaturi, otopina je sklona taloženju.Prije upotrebe, obavezno stavite otopinu u pribor na sobnu temperaturu neko vrijeme.Po potrebi ga prethodno zagrijte u vodenoj kupelji na 37°C 10 minuta da se talog otopi, te ga promiješajte prije upotrebe.
-Foregene Protease otopina ima jedinstvenu formulu, koja je aktivna kada se čuva na sobnoj temperaturi duže vrijeme (3 mjeseca);njegova aktivnost i stabilnost bit će bolje ako se čuva na 4°C, stoga se preporučuje čuvanje na 4°C, ne zaboravite da ga ne držite na -20°C.
Kolona za pročišćavanje je začepljena
U ovom se kompletu, u operaciji ekstrakcije genomske DNA, kolona za pročišćavanje izravno adsorbira na smjesu za enzimsku lizu uzorka bez koraka centrifugiranja, a kolona za pročišćavanje može biti blokirana zbog nepotpune enzimizacije i visoke viskoznosti uzorka.
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepotpuna enzimska probava uzoraka tkiva.
Preporuka: Vrijeme obrade uzorka Foregene Protease može se odgovarajuće produžiti ili se supernatant može uzeti nakon centrifugiranja na 12 000 okretaja u minuti (~13 400 × g) tijekom 5 minuta.
2. Pretjerano korištenje uzoraka tkiva ili velikih tkiva.
Preporuka: Najbolje je ne premašiti 1 bukalni bris u uzorku;ako je uzorak prevelik, povećajte dozu pufera ST1, Foregene Protease, pufera ST2 u skladu s tim.
3. Viskoznost uzorka je previsoka.
Preporuka: Uzorci se mogu primjereno razrijediti s 10 mM Tris-HCl prije ekstrakcije genomske DNA.
4. Isisani su fragmenti krvne kartice.
Preporuka: Prijelazno vrijeme centrifugiranja koraka 6 genomske ekstrakcije mrljama krvi (FTA kartica) može se odgovarajuće produžiti.
Nizak prinos ili bez DNK
Često postoje različiti čimbenici koji utječu na prinos genomske DNA, uključujući podrijetlo uzorka, uvjete skladištenja uzorka, pripremu uzorka, manipulaciju itd.
Genomska DNK se ne može dobiti tijekom ekstrakcije
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNA.
Preporuka: Oralne briseve po mogućnosti treba uzeti svježe, a nije preporučljivo koristiti konzervirane briseve za operacije ekstrakcije genomske DNA;uzorci krvnih mrlja trebaju osigurati odgovarajuću kvalitetu i vrijeme skladištenja ne smije biti predugo.
2. Premala upotreba tkiva može rezultirati izostankom ekstrakcije odgovarajuće genomske DNA.
Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje bukalnog brisa u priručniku za rad i brišite što je moguće više puta kako bi se dovoljno stanica moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK;za ekstrakciju uzorka mrlje krvi, područje rezanja mrlja krvi može se odgovarajuće povećati.
3. Foregene Protease je nepropisno očuvana, što rezultira smanjenjem njezine aktivnosti ili inaktivacijom.
Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja Foregene Protease ili je zamijenite novom Foregene Protease za enzimsku reakciju.
4. Neispravno čuvanje kompleta ili vrijeme skladištenja je predugo, što rezultira kvarom nekih komponenti u kompletu.
Preporuka: Kupite novi pribor za izolaciju DNK bukalnog brisa za srodne postupke.
5. Pufer WB ne dodaje apsolutni etanol.
Preporuka: potvrdite da pufer WB dodaje točan volumen apsolutnog etanola.
6. Eluens nije pravilno dodan u silikonski film.
Preporuka: Dodajte kapi eluenta prethodno zagrijanog na 65 °C u sredinu silikonske membrane i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali učinkovitost eluiranja.
Izolirana genomska DNA niskog prinosa
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNA.
Preporuka: Oralne briseve je poželjno uzeti svježe uzorkovane, a konzervirane briseve ne treba koristiti za ekstrakciju genomske DNA.
2. Ako je količina uzorka tkiva premala, sadržaj ekstrahirane genomske DNA bit će manji.
Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje oralnog brisa u uputama za rad, brišite što je moguće više puta kako bi se dovoljno stanica moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK.
3. Foregene Protease je nepropisno očuvana, što rezultira smanjenjem njezine aktivnosti ili inaktivacijom.
Preporuka: Provjerite uvjete skladištenja Foregene Protease ili je zamijenite novom Foregene Protease za enzimsku reakciju.
4. Problemi s eluentom.
Preporuka: Koristite pufer EB za ispiranje;ako koristite ddH2O ili drugim eluensima, potvrdite da je pH eluata između 7,0-8,5.
5. Eluat nije pravilno dodan kap po kap.
Preporuka: Dodajte kapi eluensa na sredinu silikonske membrane i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali učinkovitost eluiranja.
6. Tekućina za ispiranje nakuplja se premalo.
Preporuka: Koristite eluens za eluaciju genomske DNA prema uputama, barem ne manje od 15 μl.
Niska čistoća izolirane genomske DNA
Niska čistoća genomske DNA može dovesti do neuspjeha ili nezadovoljavajućih rezultata daljnjih eksperimenata, kao što su: enzimi se ne mogu otvoriti, PCR ne može dobiti fragment gena od interesa, itd.
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Onečišćenje heteroproteinima, onečišćenje RNA.
Analiza: Kolona za pročišćavanje nije isprana puferom PW;kolona za pročišćavanje ispiranjem pufera PW nije isprana ispravnom centrifugalnom brzinom.
Preporuka: Osigurajte da u supernatantu nema taloga prije dodavanja etanola;svakako operite kolonu za pročišćavanje u skladu s uputama, a ovaj se korak ne može izostaviti.
2. Zagađenje ionima nečistoće.
Analiza: kolona za pročišćavanje ispiranjem pufera WB izostavljena je ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.
Preporuka: Obavezno isperite Buffer WB 2 puta prema uputama kako biste uklonili zaostale ione što je više moguće.
3. Kontaminacija RNA enzima.
Analiza: strane RNaze su dodane u pufer;Operacija ispiranja pufera PW bila je netočna, što je rezultiralo ostacima RNaze, što je utjecalo na nizvodne eksperimentalne operacije RNA, kao što je in vitro transkripcija.
Preporuka: Kompleti za izolaciju nukleinske kiseline iz serije Foregene mogu ukloniti RNK bez dodatnog dodavanja RNaze, stoga komplet za izolaciju DNA za bukalni bris/FTA karticu ne mora dodavati RNazu;svakako slijedite upute za kolonu za pročišćavanje ispiranjem pufera PW i ovaj se korak ne smije izostaviti.
4. Ostatak etanola.
Analiza: Pufer WB nije izvršio centrifugiranje prazne epruvete nakon pranja kolone za pročišćavanje.
Preporuka: Izvedite ispravnu operaciju centrifugiranja prazne epruvete prema uputama.
5. Zagađenje drugim nečistoćama.
Analiza: Spremljeni uzorci ili posebni uzorci nisu prethodno tretirani.
Preporuka: temeljito prethodno obradite uzorak prema uputama.
